HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定  

作　　者：席文锦[1] 彭红艳[2] 白文栋[1] 郑国旭[1] 史圣甲[1] 皇甫罗锴[3] 王曦[3] 贾林涛[4] 张英起[5] 杨安钢[1] 

机构地区：[1]第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西西安710032 [2]新疆解放军第546医院,新疆马兰841700 [3]第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032 [4]第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710032 [5]第四军医大学药学系生物制药学教研室,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2013年第1期93-95,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金重点项目(81030045);陕西省科学技术研究发展计划社发攻关项目(2012K13-02-06)

摘　　要：目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。

关 键 词：HER2 原核表达 基因工程菌种 稳定性 

分 类 号：R392.9[医药卫生—免疫学]