大黄ISSR-PCR反应体系的建立与优化  

Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Rhubarb

作　　者：李敏[1] 齐景梁[2] 蒋彧[3] 孙淑霞[3] 敬勇[1] 

机构地区：[1]成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室,四川成都611137 [2]四川省食品药品检验所,四川成都610097 [3]四川省农业科学院园艺研究所,四川成都610066

出　　处：《成都中医药大学学报》2012年第4期29-32,45,共5页Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

基　　金：国家十一五支撑计划项目(编号:2009BAI84B01)

摘　　要：采用正交设计和单因素试验相结合的方法对影响大黄ISSR-PCR反应体系的重要因素(Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTPs、引物、DNA模板)进行优化,通过统计软件分析和直观分析获得最佳的反应体系:DNA模板30 ng,2.5μL 10×Taq Buffer,dNTPs 0.4 mmol/L、引物0.25μmol/L、Mg2+2.5mmol/L、Taq DNA聚合酶1.25 U。An orthogonal design combined with single factor experiment was applied to optimize ISSR-PCR amplification system of Rhubarb.The main elements of the reaction system（Mg2＋、Taq DNA polymerase、dNTPs、Primer、DNA template） were tested.The result was analyzed by statistics software and direct analyzing.A suitable ISSR-PCR reaction system was established.Namely 25μL reaction system containing 30 ng DNA template,2.5μL 10×Taq Buffer,0.4mmol/L dNTPs,0.25μmol/L primer,2.5 mmol/L Mg2＋,1.25U Taq DNA polymerase.

关 键 词：大黄 ISSR-PCR 正交设计 单因素试验 

分 类 号：R282.7[医药卫生—中药学] R284.1[医药卫生—中医学]