棉花细菌人工染色体文库构建方法探讨  

Studies on Construction Method of Cotton Bacterial Artificial Chromosome Library

作　　者：高海燕[1,2] 王省芬[2] 刘方[1] 彭仁海[1,3] 张艳[2] 马峙英[2] 王坤波[1] 

机构地区：[1]棉花生物学国家重点实验室/中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000 [2]华北作物种质资源教育部重点实验室/河北省作物种质资源重点实验室/河北农业大学,河北保定071001 [3]安阳工学院,河南安阳455000

出　　处：《棉花学报》2013年第1期9-16,共8页Cotton Science

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)(2010CB126000);国家高技术研究发展计划(863)(2012AA101108);农业部保种项目(NB2012-2130135-29B)

摘　　要：细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)文库是开展基因组测序、基因图位克隆、分子标记、物理作图等研究的重要基因组资源。本文在构建了二倍体野生棉阿非利加棉(Gossypium herbaceum var.africanum)BAC文库的基础上,就棉花细菌人工染色体基因组文库构建过程中高分子量基因组DNA的提取、部分酶切片段选择、DNA的回收、连接转化以及BAC文库的保存等过程中一些细节和注意事项进行了比较详细的分析比较,希望能为棉花BAC文库的构建提供一些可供借鉴的经验。Bacterial artificial chromosome （BAC） library is an important genome resources to such research as genome sequenc- ing, map-based cloning, molecular markers, and physical mapping. On the base of the construction of BAC library for Gossypi- um herbaceum var. africanum, this paper presents an exhaustive analysis on details and notices of the BAC library construction process. It includes extraction of high molecular weight （HMW） nuclear DNA, determination of the optimized enzyme for partial digestion of HMW DNA, two rounds of size fractionation, recovery of large fragments DNA, ligation and transformation of large fragments of DNA and storage of BAC library. Thus being able to supply an experience for constructing high efficiency cotton BAC library.

关 键 词：细菌人工染色体文库 野生棉 构建方法 

分 类 号：S562[农业科学—作物学]