转录因子Pax-8基因干扰后线粒体功能对心肌细胞凋亡的影响  

Impact of Pax-8 gene interference on mitochondrial function and cardiomyocyte apoptosis

作　　者：戴晓春[1] 周希[1] 黄晓燕[1] 王良国[1] 林素[1] 杨德业[1] 

机构地区：[1]温州医学院附属第一医院心内科温州医学院心血管生物和基因研究所,温州325000

出　　处：《中华心血管病杂志》2013年第1期54-59,共6页Chinese Journal of Cardiology

基　　金：国家自然科学基金（30571050）;浙江省自然科学基金项目（Y2110112）;温州市科技计划项目（Y20100016）

摘　　要：目的采用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达，引起线粒体功能的变化，借此探讨线粒体对心肌细胞凋亡的影响。方法将H9C2（2-1）大鼠胚胎心肌细胞分为3组：实验组[针对Pax-8基因的小干扰RNA（Pax-8siRNA）组]，阴性对照组[非特异性siRNA（NCsiRNA）组]和空白对照组（BCsiRNA组）。荧光分光光度法检测半胱天冬酶（caspase-3）活性以反映细胞凋亡，RT—PCR测定B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcelllymphoma／lewkmia-2，Bcl2）和其同源类似物Bax的mRNA表达，Westernblot测定Bcl2、Bax和胞浆细胞色素C（Cyto）的蛋白表达，流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位（△咿m，用JC-1单体／聚合物比值来衡量线粒体去极化的比例，比值越大，△ψm越低）。结果Pax-8siRNA组心肌细胞caspase-3活性（0．167±0．012）明显高于NCsiRNA组（0．075±0．021）和BCsiRNA组（0．072±0．019），P均〈0．05。Pax-8siRNA组Bcl，mRNA和蛋白的表达水平（分别为0．61±0．06和0．94±0．11）明显低于NCsiRNA组（分别为0．90±0．070和1．39±0．15）和BCsiRNA组（分别为0．94±0．09和1．49±0．20），P均〈0．05。Pax-8siRNA组BaxmRNA和蛋白表达水平（分别为1．05±0．10和1．25±0．12）明显高于NCsiRNA组（分别为0．72±0．03和0．99±0．12）和BCsiRNA组（分别为0．64±0．03和0．92±0．06），P均〈0．05。Pax-8siRNA组心肌细胞线粒体释放Cyto至胞浆的量（0．75±0．14）明显高于NCsiRNA组（0．51±0．06）和BCsiRNA组（0．48±0．07），P均〈0．05。Pax-8siRNA组JC-1单体／聚合物比值（0．163±0．011）明显高于NCsiRNA组（0．092±0．015）和BCsiRNA组（0．072±0．025），P均〈0．05，提示Aqtm明显低于NCsiRNA组和BCsiRNA组（P均〈0．05）。NCsiRNA组与BCsiRNA组上述指标比较，差异均无统计学意义。结论Pax-8基因干扰心肌细胞，促进了心肌细胞的凋亡，线粒体参与了心肌�Objective To observe the effects of paired box gene 8 （Pax-8） silencing by RNA interference on mitochondrial function and eardiomyocytes apoptosis. Methods The cultured H9C2 （ 2-1 ） myoeytes were divided into 3 groups ： short interference RNA targeting Pax-8 （ Pax-8 siRNA） group, nonspecific siRNA group as the negative control （ NC siRNA） , and blank control group （ BC siRNA ）. Fluo reseence spectrophotometry was used to detect the activity of caspase-3. RT-PCR was performed to detect mRNA expression of Bcl2 and Bax. The protein expression of Bcl2 , Bax and cytoplasm of Cytothrome was examined by Western blot. Changes of AqCm were detected by flow cytometry. AWm with JC-1 monomer/ polymer ratio was calculated for measuring mitochondrial depolarization proportion. Results Compared to NC siRNA and BC siRNA group（0. 075 ＋0. 021,0. 072 -＋0. 019） , the activity of caspase-3 in Pax-8 siRNA group （0. 167 ±0. 012） was significantly increased （P 〈 0. 05 ） ; Bcl： mRNA and protein expression in Pax-8 siRNA group （0. 61 e0. 06, 0. 94 ＋0. 11 ） were significantly downregulated compared with NC siRNA group （0.90＋0.070, 1.39 ±0.15） and BC siRNA group （0.94±0.087, 1.49 ±0.20） （P〈0.05）; Bax mRNA and protein expression in Pax-8 siRNA group （1.05 ± 0. 10, 1.25 ±0. 12 ） were markedly upregulated compared with NC siRNA group （0. 72 ±0. 03, 0. 99 ±0. 12） and BC siRNA group （0. 64 ±0. 03, 0. 92 ±0. 06） ,P 〈 0. 05; cytosolic cytochrome expression in Pax-8 siRNA group （0. 75 ±0. 14） was significantly upregulated compared with NC siRNA group （0. 51 ±0. 06） and BC siRNA group （0. 48 ±0. 07） （P 〈0. 05） ; JC-1 monomer/polymer ratio in Pax-8 siRNA group （0. 163 ±0. 011） was significantly increased compared with NC siRNA group（0. 092 ±0. 015） and BC siRNA group （0. 072 ±0. 025） （P 〈 0. 05 ） indicating mitochondrial membrane potential was significantly reduced in Pax-8 siRNA group. Above parameters were similar betwee

关 键 词：肌细胞 心脏 细胞凋亡 线粒体 转录因子 

分 类 号：R541.1[医药卫生—心血管疾病]