风信子ISSR-PCR体系的优化及引物筛选  

Optimization of ISSR-PCR Reaction System and Primer Selection for Hyacinth

作　　者：胡凤荣[1,2] 王斐[2] 王志强[1] 任翠[2] 鲍仁蕾[2] 

机构地区：[1]北京林业大学,北京100083 [2]南京林业大学,南京210037

出　　处：《分子植物育种》2013年第1期139-144,共6页Molecular Plant Breeding

基　　金：中国博士后科学基金面上项目(20100470217);江苏省高校优势学科建设工程项目共同资助

摘　　要：以风信子基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验方法,对影响PCR扩增体系中Mg2+浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶的用量5个因素进行研究,建立了风信子ISSR-PCR扩增最佳反应体系,即:20μL反应体系中分别加入2μL10×Buffer、1.4μL Mg2+(25mmol/L)、1.5μL dNTPs(2.5mmol/L)、1.5μL引物(10pmol/μL),0.2μLTaq酶(5U/μL),1.2μL模板(30ng/μL),ddH2O补足体积。并以此体系对110条引物进行筛选,最终获得了多态性高,重复性好的引物12条。Genomic DNA extracted from Hyacinth was used as template for ISSR-PCR, the impact factors in PCR system, Mg2＋ concentration, dNTPs, template DNA, primer concentration and Taq polymerase, were studied using a single factor experiment method by setting up different volume gradient to establish the hyacinth ISSR-PCR reaction system. The experiment results showed that the best reaction system was adding in turn with 2 μL 10×Buffer, 1.4 μL Mg2＋ （25 mmol/L）, 1.5 μL dNTPs （2.5 mmol/L）, 1.5 μL primer （10 pmol/μL）, 0.2 μL Taq polymerase （5 U/μL, 1.2 μL template （30 ng/μL）, and ddH2O to 20 μL at last. According to this PCR system, 110 primers were selected, eventually thirteen primers showed high polymorphism and repeatability.

关 键 词：风信子 ISSR-PCR 引物筛选 

分 类 号：S682.29[农业科学—观赏园艺]