仓鼠经口给予亚砷酸盐后血浆中砷结合蛋白的纯化  

Purification of arsenic-binding proteins in hamster plasma after oral administration of arsenite

作　　者：王文文[1,2] 张敏[1,2] 李春辉[3] 秦颖洁[3] 那仁满都拉[2] 

机构地区：[1]承德医学院病理及病理生理教研室,河北承德067000 [2]浙江大学药理毒理与生化药学研究所,浙江杭州310058 [3]承德医学院附属医院,河北承德067000

出　　处：《浙江大学学报（医学版）》2013年第1期32-37,共6页Journal of Zhejiang University(Medical Sciences)

基　　金：国家自然科学基金项目(81001477,81274138);浙江省自然科学基金杰出青年项目(R2110231);浙江省重点科技创新团队项目(2010R50047)

摘　　要：目的:探索用凝胶过滤柱和阴离子交换柱,结合电感耦合等离子质谱仪分离纯化砷结合蛋白,为阐明砷的毒理机制提供技术支持。方法:通过HPLC-ICP-MS技术,采用KW-803色谱柱、凝胶过滤柱和离子交换柱分离纯化仓鼠血浆中的砷结合蛋白;SDS-PAGE凝胶电泳分析由HPLC-ICP-MS系统凝胶过滤柱和离子交换柱获得的每个蛋白样本。结果:①仓鼠单次经口给予三价亚砷酸(iAsⅢ)后,运用三步法即利用凝胶过滤、KW-803色谱柱和阴离子交换等色谱柱联用HPLC-ICP-MS,最后纯化得到了仓鼠血浆中砷结合蛋白;②SDS-PAGE凝胶电泳分析由HPLC-ICP-MS系统联用不同凝胶过滤柱和离子交换柱获得的每个蛋白样本,检测到砷结合蛋白分子量大约40～50 kD。结论:凝胶过滤柱和阴离子交换柱,结合电感耦合等离子质谱仪是分离纯化动物血浆或组织上清砷结合蛋白简便快速的方法。Objective： To purify the arsenic-binding proteins （As-BP） in hamster plasma after a single oral administration of arsenite （iAsIIII ）. Methods： Arsenite was given to hamsters in a single dose. Three types of HPLC columns, size exclusion, gel filtration and anion exchange columns, combined with an inductively coupled argon plasma mass spectrometer （ICP MS） were used to purify the As-BP in hamster plasma. SDS-PAGE was used to confirm the arsenic-binding proteins at each purification step. Results：The three-step purification process successfully separated As-BP from other proteins （ie,arsenic unbound proteins） in hamster plasma. The molecular mass of purified As-BP in plasma was approximately 40 -50 kD on SDS-PAGE. Conclusion： The three-step purification method is a simple and fast approach to purify the As-BP in plasma samples.

关 键 词：亚砷酸盐类 药理学 亚砷酸盐类 血液 亚砷酸盐类 分离和提纯 砷 分离和提纯 色谱法 高压液相 质谱分析法 色谱法 凝胶 方法 肿瘤 仓鼠 

分 类 号：R114[医药卫生—卫生毒理学]