4″-异戊酰基转移酶基因重组质粒构建及其异源表达  

Construction of Recombinant Plasmid Improves Heterologously Expression of the 4″-isovaleyltrasferase Gene

作　　者：肖祥[1] 李大荣[1] 梁剑光[1] 赫卫清[2] 

机构地区：[1]常熟理工学院生物与食品工程学院,江苏常熟215500 [2]中国医学科学院医药生物技术研究所,北京100050

出　　处：《生物技术》2012年第5期10-13,共4页Biotechnology

基　　金：江苏省高校自然科学基金项目(11KJB180001);常熟理工学院青年教师科研启动项目(KY2010138);常熟理工学院本科毕业论文团队重点项目(2012TD10)资助

摘　　要：目的:通过构建重组质粒,异源表达4″-异戊酰基转移酶基因(4″-isovaleyltrasferase gene,ist)生产螺旋霉素。方法:在螺旋霉素的4″位加上异戊酰基侧链从而获得基因药物必特螺旋霉素基因。结果:研究表明acyB2基因是ist的正调控基因,ist基因与acyB2基因构建的ist-acyB2共表达质粒不能在变铅青链霉菌TK24中表达。启动区点突变的回复表明770bp到780bp之间有一碱基由原来的A回复成G。结论:经测序研究后发现在ist的启动区产生了一个点突变,拟回复此突变之后重新构建新的ist-acyB2载体,可用于检测ist基因在异源宿主中的表达情况。Objective：Using the recombinant plasmid, bitespiramycin was produced by expressed a heterologous 4” - isovaleryltransferase gene（/st）. Method：Bitespiramycin was produced by expressing a heterologous 4”-isovaleryltransferase gene （/st）in the spiramycin pro- ducing strain to add a isovaleryl group at 4” site of the spiramycin. Result：The acyB2 gene is positive regulator of/st gene expression. The construct of/st - acyB2 co - expression didn＇ t work in the S. lividans TK24. One single mutation was identified in the promoter region of/st gene. Condusion：We plan to recover this mutation and construct a new plasmid containing the/st- acyB2 genes,then transform this plas- mid to cell and check the situation of/st expression.

关 键 词：异戊酰基转移酶基因 必特螺旋霉素 重组质粒 异源表达 

分 类 号：Q819[生物学—生物工程]