芋ISSR-PCR扩增反应体系的建立  

Establishment ISSR-PCR Reaction System for Taro

作　　者：董红霞[1] 钟兰[1] 王芸[1] 黄新芳[1] 孙亚林[1] 刘玉平[1] 刘义满[1] 柯卫东[1] 

机构地区：[1]武汉市蔬菜科学研究所,湖北武汉430065

出　　处：《生物技术》2012年第5期40-43,共4页Biotechnology

基　　金：国家科技支撑计划项目(编号:2012BAD27B01);湖北省自然科学基金项目(编号:2011CDC059)共同资助

摘　　要：目的:获得清晰可靠、重复性较好的ISSR-PCR扩增反应体系,应用于芋种质资源进行遗传多样性的研究中。方法:以芋的幼叶提取基因组DNA为材料,采用正交试验设计L16(45),从模板DNA浓度、引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度及TaqDNA聚合酶的用量5因素4水平出发,构建芋最佳反应体系。结果:芋ISSR-PCR的最佳反应体系为:在25μl的反应体系中,40ng DNA模板、0.4μmol/L引物浓度、2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、1 U Taq DNA聚合酶。结论:利用芋种质资源对最佳反应体系的验证,结果显示该反应体系具有扩增稳定性。Objcclive：Analysis of genetic diversity of Taro（ Colocasia esculenta）based on ISSR marker, In order to obtain clear and relia-ble, reproducible ISSR amplification. Method： genomic DNA was extracted from taro leaves, orthogonal design with four levels （ DNA tern- plate concentration,primerMg 2＋ concentration, Mg concentration, dNTPs and Taq DNA polymerase concentration） of five factors was used toconstruct the optimal ISSR - PCR reaction system of taro. Result： The most suitable amplification ISSR - PCR reaction system which con- rained 40 ng DNA template,0. 4 umol/L primer,2. 5 mmol/L Mg2＋,0. 2 mmol/L dNTPs,1 U Taq DNA in a total volume of 25p1 was es- tablished. Conclusion： Verification of the optimistic ISSR - PCR reaction system in taro germplasm resources showed that this amplification system was suitable and stable.

关 键 词：芋 ISSR 反应体系 遗传多样性 

分 类 号：S645.9[农业科学—蔬菜学]