和田羊Myostatin蛋白成熟肽的基因克隆及原核表达  

作　　者：姜仁军[1] 李树伟[1] 邓芳[1] 

机构地区：[1]塔里木大学生命科学学院塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室,新疆阿拉尔843300

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2013年第3期42-46,共5页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：新疆生产建设兵团科技局博士基金资助项目(2010JC08)

摘　　要：为了克隆和田羊肌肉生长抑制素(Myostatin)蛋白成熟肽编码基因片段,并对其进行原核表达,试验根据绵羊Myostatin蛋白成熟肽基因序列从GenBank(登录号为NM_001009428)中设计并合成1对引物。以塔里木大学动物基因工程实验室构建的和田羊Myostatin基因全序列的克隆载体为模板,采用PCR方法特异性扩增和田羊Myostatin蛋白成熟肽基因片段;将其克隆到pMD18-T载体中,构建克隆质粒pMD18-T-Ms;经PCR和双酶切分析鉴定,将阳性克隆送上海生工生物工程技术服务有限公司测序验证;测序验证后双酶切pMD18-T-Ms克隆质粒和pET-28a(+)表达质粒,进一步构建pET-28a(+)-Ms重组表达质粒。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达Myostatin蛋白成熟肽,通过SDS-PAGE电泳分析鉴定表达的重组蛋白。结果表明:PCR特异性扩增出1条长度约为330 bp的条带;序列测定分析显示和田羊Myostatin蛋白成熟肽基因片段长327 bp,与GenBank上绵羊Myostatin蛋白成熟肽编码基因从799～1 125 bp片段的核苷酸同源性为100%,所表达的Myostatin蛋白成熟肽分子质量约为14.7 ku。试验成功克隆和田羊Myostatin蛋白成熟肽编码基因片段,构建了其克隆质粒pMD18-T-Ms和重组表达质粒pET-28a(+)-Ms,并在大肠杆菌中获得有效表达。

关 键 词：绵羊 肌肉生长抑制素(Myostatin)蛋白成熟肽 克隆 原核表达 

分 类 号：Q343.1[生物学—遗传学]