过氧化损伤及抗氧化能力时间动态变化与造血干/祖细胞衰老的相关性  

The dynamic changes of peroxidation and antioxidation in hematopoietic stem/progenitor cells aging

作　　者：耿珊[1] 张琛[1] 徐春燕[1] 姜蓉[1] 王璐[1] 王建伟[1] 王亚平[1] 

机构地区：[1]重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室,重庆400016

出　　处：《中国老年学杂志》2013年第5期1061-1063,共3页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：国家自然科学基金课题资助(81173398;30973818;30970872)

摘　　要：目的探讨增龄过程中小鼠Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)过氧化损伤及抗氧化能力的动态变化与其衰老的关系。方法 C57BL/6J雄性小鼠分为幼年组(3～4周龄),青年组(2月龄),中年组(6月龄),中老年组(12月龄),老年组(18月龄)。提取各组小鼠骨髓单个核细胞,免疫磁性吸附细胞分选法(MACS)分离纯化Sca-1+细胞群,WST法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)含量,TNB显色法检测细胞总谷胱甘肽(GSSG+GSH)含量,WST-1法检测超氧化物含量,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察各年龄组阳性细胞百分比,造血祖细胞混合集落培养比较各年龄组Sca-1+细胞形成集落能力。结果总SOD活力值、GSSG+GSH含量、超氧化物含量吸光度、MDA含量、SA-β-Gal阳性细胞百分比及混合集落形成率分别在幼年组为(27.51±1.11)U/g、(28.78±0.77)μmol/L、(0.114±0.005)、(2.06±0.54)nmol/mg、(2.26±0.65)%、(8.79±0.56);青年组为(38.23±3.50)U/g、(31.48±2.03)μmol/L、(0.109±0.005)、(0.81±0.35)nmol/mg、(9.08±2.74)%、(9.48±0.74);中年组为(28.85±0.65)U/g、(47.62±4.93)μmol/L、(0.133±0.002)、(2.69±0.62)nmol/mg、(11.58±0.89)%、(5.14±0.89);中老年组(12.67±0.89)U/g、(25.63±1.23)μmol/L、(0.151±0.009)、(11.44±1.19)nmol/mg、(35.34±2.50)%、(1.56±0.23);老年组为(17.52±1.27)U/g、(39.10±2.19)μmol/L、(0.141±0.005)、(7.06±0.95)nmol/mg、(15.76±1.23)%、(0.98±0.50)。结论随年龄增加Sca-1+HSC/HPC的SA-β-Gal阳性细胞百分比逐渐增高,混合集落形成能力下降,SOD活性、GSSG+GSH含量逐步降低,而超氧化物、MDA含量逐渐增加,提示在增龄过程Sca-1+HSC/HPC过氧化损伤,抗氧化能力逐渐降低是造血干细胞衰老的可能机制之一。Objective To investigate the dynamic changes of peroxidation and antioxidation in Sca-1＋ hemopoietic stem/progenitor cells of aging mice. Methods Sixty C57BL/6J mice were divided into 3 - 4 weeks, 2, 6, 12, 18 months group,20 mice in 3 - 4 weeks group, 10 mice in others. The mice were executed to wash out bone marrow. The MACS was applied to obtain the Sea-1＋ hematopoietic stem/progenitor ceils from mouse bone marrow respectively. The TNB colour test, WST-1 method and thiobarbituric acid methods were used to detect total glutathione （ GSSG ＋ GSH）, superoxide dismutase （SOD）, superoxide and malondialdehyde （MDA） levels in the Sea-1 ~ hematopoietic stem/progenitor cells of these mice. The percentage of SA-13-gal positive cells was detected by senescence-associated 13-galac- tosidase（SA-β-Gal） staining. The ability to forming CFU-Mix was tested. Results The SOD contents of Sca-1＋ HSC/HPC in five groups were （27.51 ±1.11 ）, （38.23 ± 3.50）, （28.85± 0.65 ）, （ 12. 67 ± 0. 89）, （ 17.52 ±1.27 ） U/g （ P 〈 O. 01 ） . The total glntathione con- tents were （28.78 ± 0.77）, （31.48 ± 2.03 ）, （47. 62 ± 4.93 ）, （25.63 ±1. 23 ）, （39. 10 ± 2. 19 ） μmol/L （ P 〈 O. 01 ）. The optical density reflected by superexide contents were （0. 114 ±0. 005）, （0. 109 ±0. 005）, （0. 133 ±0. 002）, （0. 151 sO. 009）, （0. 141 ±0. 005） （P 〈 0. 01）. The MDA contents were （2.06 ±0.54）, （0.81 ±0.35）, （2.69 ±0.62）, （11.44 ±1. 19）, （7.06 ±0.95） nmol/mg （P〈 O. 01 ）. The percentages of SA-15-gal positive cells were （ 2. 26 ± 0.65 ） %, （ 9. 08 ± 2. 74 ） %, （ 11.58 s 0. 89 ） %, （ 35.34 s 2. 50 ） %, （ 15.76 s 1.23） %. The numbers of CFU-Mix were （8.79± 0. 56） , （9.48± O. 74）, （ 5.14 ± O. 89）, （ 1.56 ± 0. 23 ）, （0. 98 ± O. 50）. Conclusions With aging, the contents of total glutathione and SOD are decreased, the contents of superoxide and MDA are increased, which indicates th

关 键 词：Sca-1+造血干 祖细胞 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽 超氧化物 丙二醛 

分 类 号：R329.2[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]