日本乙型脑炎病毒贵州分离株NS1基因克隆及表达载体的构建  

作　　者：王凤[1] 汤德元[1] 罗险峰[2] 曾智勇[1] 马萍[2] 李春燕[1] 

机构地区：[1]贵州大学动物科学学院,贵阳550025 [2]贵州省动物疫病预防控制中心,贵阳550008

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2013年第4期90-93,共4页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：2006年贵州省高层次人才科研条件特助经费项目(TZJF-2006年01号);贵州省2011年农业攻关项目(黔科合NY字(2011)3103号)

摘　　要：为了研究日本乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因工程疫苗、生物免疫活性及细胞因子IL-2对真核表达的影响,试验采用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株(GZ株)NS1 cDNA,克隆到pMD19-T载体上,再进行双酶切并回收目的片段,分别与pET32a(+)和pcDNA3.1(+)载体连接并转化入感受态细胞Top10中,构建原核表达载体pET32a(+)-NS1和真核表达载体pcDNA3.1(+)-NS1,并将NS1基因插入已经构建好的重组质粒pcDNA3.1(+)-IL-2上,构建以IL-2融合表达的真核载体pcDNA3.1(+)-IL-2-NS1,分别通过抽提阳性质粒酶切鉴定和测序后,应用DNAStar等生物软件进行序列分析,最后进行原核表达载体和真核表达载体双酶切及测序。结果表明:JEV GZ株NS1 cDNA全长为1 245 bp,可编码415个氨基酸。说明JEV GZ株NS1 cDNA克隆成功,JEV GZ株NS1基因的原核表达载体、真核表达载体以及IL-2融合表达的真核载体构建成功。

关 键 词：日本乙型脑炎病毒 贵州分离株 NS1基因 表达载体 构建 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]