地中海拟无枝菌酸菌U32中amrC/amkC基因的序列分析及在大肠杆菌中的表达  

Sequence Analysis of A Putative Two-component Signal Tranduction System mrC/amkC Gene from Amycolatopsis mediterranei U32 and Their Expression in Escherichia coli

作　　者：高瑾[1] 王伟武 姜卫红[1] 赵国屏[2] 焦瑞身[1] 

机构地区：[1]中国科学院上海植物生理研究所,微生物次生代谢分子调控开放实验室,上海200032 [2]中国科学院上海生物工程研究中心,上海200233

出　　处：《生物工程学报》2000年第6期684-689,共6页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家自然科学基金资助项目!( 3 963 0 0 10 )

摘　　要：从力复霉素SV产生菌———地中海拟无枝菌酸菌 (Amycolatopsismediterranei)U32的硝酸盐同化基因簇的上游克隆了一个 2 6kb的EcoRI—XhoIDNA片段并测定其序列。序列分析表明 ,该DNA片段编码两个完整的开放阅读框架 (ORF) ,ORF2的起始密码子GTG与ORF1的终止密码子TGA在TG处重叠。ORF1编码一个含2 2 4个氨基酸的多肽 ,它同放线菌中典型的应答调节蛋白包括AfsQ1和MtrA有很高的同源性 ;ORF2编码一个含472个氨基酸的蛋白 ,它同包括AfsQ2和MtrB在内的组氨酸激酶同源。ORF1和ORF2有可能构成典型的双组份信号传导系统 ,分别命名为amrC和amkC。在T7启动子的控制下 ,完整的amrC和去除子N端一个可能的跨膜区的amkC在大肠杆菌中分别得到了高效表达 ,表达蛋白的分子量分别为 30kD和 46kD ,与推测蛋白的分子量一致。A 2.6kb Eco RI\| Xho I fragment,from the upstream region of the nitrate assimilatory gene cluster of rifamycin SV\_producing Amycoloatopsis mediterranei U32,was cloned and sequenced.Sequence analysis showed two complete ORFs.ORF1 and ORF2 are overlapped in the TGA of ORF1 and the GTG of ORF2.ORF1 encodes a polypeptide of 224 amino acids which displays high similarities with the typical response regulators of actinomycetes including AfsQ1 and MtrA,whereas ORF2 encodes a protein of 472 amino acids which displays homologies with the histidine kinase such as AfsQ2 and MtrB.The Two ORFs form aputative two\|component signal tansduction system AmrC/AmkC.Fusion expression analysis in the T7 system showed that amrC encoded a fusion protein with an apparent molecular mass of 30kD,the trucated amkC encoded a polypeptide with molecular mass of 46kD.

关 键 词：地中海拟无枝菌酸菌 序列分析 表达 力复霉素 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]