银鲫与彩鲫卵母细胞cDNA文库构建及周期蛋白A_1的cDNA克隆  

作　　者：樊连春[1,2] 谢京[1,2] 汪洋[1,2] 桂建芳[1,2] 

机构地区：[1]中国科学院水生生物研究所 [2]淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉430072

出　　处：《水生生物学报》2000年第6期573-581,共9页Acta Hydrobiologica Sinica

基　　金：国家自然科学基金!(批准号 :3970 0 0 70 ;39730 2 90 ;3982 30 0 3);国家重点基础研究项目!(G1 9990 5390 8);中国科学院基础研究

摘　　要：分别取行天然雌核发育繁殖的银鲫和两性生殖的彩鲫的卵母细胞为材料 ,提取总RNA ,分离mRNA ,进而反转录合成cDNA并定向插入λgtllSfi Not克隆载体 ,经体外包装构建了银鲫与彩鲫卵母细胞的表达型cDNA文库。测试结果表明库容量分别达到 3 1× 1 0 6(银鲫 )和 1 6× 1 0 6(彩鲫 )。进一步人工合成CyclinA1 保守引物 ,采用PCR扩增文库的方法 ,克隆了银鲫 (1 61 6bp)与彩鲫 (1 62 6bp)的CyclinA1 全长cDNA。序列分析结果表明 :两种鱼编码区长度均为 1 1 73bp ,起始于一个包含在脊椎动物起始密码子ANNATG基元内ATG的单一开放读码框 ,编码 391个氨基酸 ;5’ -端非编码区长度也同为 70bp ,3-’端非编码区长度略有不同 ,银鲫为 373bp ,而彩鲫则为 383bp ;二者 3’ -端均带有AATAAA的Poly(A)加尾信号以及 2 4bp(银鲫 )和 2 7bp(彩鲫 )的Poly(A)尾巴。比较银鲫、彩鲫和金鱼与人、爪蟾CyclinA1氨基酸序列同源性的结果表明 ,CyclinA1 在人、爪蟾与鱼类之间具有较高同源性 ;而在银鲫、彩鲫和金鱼之间 ,CyclinA1 仅在周期蛋白框外存在 5个氨基酸的差异 ,且这些差异均是由个别碱基的变异造成的。

关 键 词：雌核发育 银鲫 彩鲫 CDNA文库 周期蛋白A1 

分 类 号：Q959.468[生物学—动物学] S965.117[农业科学—水产养殖]