抗B型葡萄球菌肠毒素高亲和力单链抗体的制备  

作　　者：孙元杰[1] 李永明[1] 张葵[1] 魏玉英[1] 宋朝君[1] 周幸春[1] 金伯泉[1] 杨琨[1] 

机构地区：[1]第四军医大学基础医学院免疫学系,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2013年第4期403-406,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：新药创制科技重大专项(2008ZXJ09003-009;2012ZX09J12106-02B)

摘　　要：目的构建针对B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的特异性单链抗体(scFv),并进行纯化和鉴定。方法设计抗SEB高亲和力单克隆抗体(mAb)FMU-SEB-No.2重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL基因片段;然后通过在轻链引物上设计linker序列,重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成scFv基因片段,并将其克隆入原核表达载体PGEX4T-1中;转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,融合蛋白经谷胱甘肽亲和层吸柱纯化。采用SDS-PAGE,Western blot,ELISA等方法对其表达水平和特异性进行分析。结果成功从1株抗SEB mAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL可变区基因,并通过linker序列将其拼接成scFv片段,大小约750 bp,编码250个氨基酸。PCR、酶切鉴定和测序结果表明表达载体构建成功。转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,以可溶形式表达相对分子质量(Mr)约54 000的融合蛋白。经谷胱甘肽亲和层析法纯化融合蛋白,可获得纯度达90%以上的scFv,ELISA和Western blot法检测结果表明,可溶性scFv与抗原SEB有较强的结合活性。结论成功构建并表达出抗SEB的特异性单链抗体。

关 键 词：B型葡萄球菌肠毒素 重链和轻链可变区基因 单链抗体 原核表达 ELISA WESTERN BLOT 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学] R378.11[医药卫生—基础医学]