重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗构建和免疫保护效果  

Characterization and immunoprotective efficacy of recombinant influenza virus as a vector expressing attachment protein epitope of respiratory syncytial virus

作　　者：卞成蓉[1,2,3] 刘娜[1,2] 邢丽[2] 段跃强[2] 王希良[2] 周娅[1] 杨鹏辉[2] 

机构地区：[1]宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室,银川750004 [2]军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京100071 [3]解放军第302医院临床检验中心,北京100039

出　　处：《免疫学杂志》2013年第5期369-375,共7页Immunological Journal

基　　金：国家自然科学基金项目(30800977);北京自然科学基金项目(7112105);国家973项目(2009CB522102)

摘　　要：目的构建和拯救重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株,并通过动物实验评价其免疫原性及免疫保护性。方法利用流感病毒反向遗传学技术,以流感病毒为载体,将RSV保护性抗原G蛋白表位的基因插入到流感病毒非结构蛋白NS1基因,拯救重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G,进而对rFLU/RSV/G的特性进行全面鉴定。rFLU/RSV/G滴鼻免疫Balb/c小鼠,通过检测中和抗体效价、血清抗体(IgG、IgG1、IgG2a)和黏膜抗体sIgA效价以及细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α)的分泌量来评价机体产生的体液、细胞和黏膜免疫反应。攻毒实验评价rFLU/RSV/G的免疫保护性,观测小鼠的体质量变化、病毒载量、存活情况以及肺病理变化。结果成功拯救出重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G。重组病毒rFLU/RSV/G与流感病毒颗粒形态和大小分布相符,并且表达针对RSV的特异性蛋白NS1-G。动物实验表明rFLU/RSV/G诱导小鼠机体产生较高的中和抗体、RSV特异性的Th1型细胞免疫反应以及黏膜免疫反应。攻毒实验显示rFLU/RSV/G对RSV A2株和PR8流感病毒野毒株具有一定免疫保护效果,能够有效降低肺鼻的病毒载量,肺组织病变情况明显减轻,且无小鼠死亡。结论重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G是一个有前景的RSV候选疫苗株,具有较高的免疫原性和免疫保护性,值得在棉鼠和猴子进行进一步研究。Respiratory syncytial virus （RSV） is the most major viral pathogens causing of respiratory infection in infants and elderly, and currently no vaccine is available. In this report, by using reverse genetics （RG） we generated a recombinant influenza virus with the RSV attachment （G） protein epitope （rFlu/RSV/G） gene inserted into the influenza nonstructural （NS1） protein gene. The expression of NS1-G protein was detected by Western blotting and rFlu/RSV/G morphology was observed by electron microscope. Next, Balb/c mice immunized intranasally with rFlu/RSV/G showed a specific viral antibody response against influenza and RSV. We studied the active immunity, antibodies （IgG, IgG1, IgG2a and IgA） and cytokines （IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ and TNF-α） response against RSV-A2 viruses in Balb/c mice, which demonstrated that immunization with rFlu/RSV/G elicited a cellular immune response in serum and mucosal immune response in murine mucosal secretions. Furthermore, we found rFlu/RSV/G could afford protection against subsequent RSV and influenza virus challenge showing significant decrease of viral replication, obvious alleviation of histopathological changes in the challenged mouse lung and no death. Our findings suggested that recombinant rFlu/RSV/G warrant further development as a promising candidate vaccine and immune protective effects should be confirmed in cotton mouse and monkey model.

关 键 词：流感病毒 RSV G蛋白表位 病毒载体 

分 类 号：R392.7[医药卫生—免疫学]