真鲷虹彩病毒辽宁株跨膜蛋白(ORF049L)基因的克隆及表达  

Cloning,and expression of red sea bream iridovirus Liaoning strain(ORF049L) gene

作　　者：孙志鹏[1] 徐祥[1] 李强[1] 叶仕根[1] 李华[1] 

机构地区：[1]大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室,辽宁大连116023

出　　处：《大连海洋大学学报》2013年第2期148-153,共6页Journal of Dalian Ocean University

基　　金：国家"十二五"科技支撑计划项目(2011BAD13B03);海洋公益性行业科研专项(200905020);辽宁省海洋与渔业厅科研项目(201005)

摘　　要：克隆了真鲷虹彩病毒辽宁株(RSIV-LN09)跨膜蛋白(ORF049L)基因,利用生物信息学方法,对该基因编码蛋白的跨膜区及B细胞抗原位点等特征进行了分析。随后将该序列连接至pET-28a表达载体中,成功构建了pET-28a-ORF049L原核表达质粒。将表达质粒转化至BL21(DE3)菌株后,经IPTG诱导获得大量携带组氨酸标签的融合蛋白。该融合蛋白经变性后采用镍层析柱进行亲和纯化,纯化蛋白再经SDS-PAGE和Western blot分析,确认获得了相对分子质量约为17 000的高纯度重组蛋白His-049L。本研究结果为病毒跨膜蛋白单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础。ORF049L of red sea bream iridovirus Liaoning strain（ RSIV-LN09 ） gene coding a transmembrane protein was cloned, and the transmembrane region and B cell epitope were analyzed by bioinformaties. Then the ORFwas inserted into the prokaryotic vector pET-28a,and a fusion protein with His-tag were obtained in Escherichia coli BL21 （DE3） induced with IPTG. After denaturation, the recombinant protein was purified by affinity chromatography and identified as a specific band of 17 000（His-049L） in molecular weight by SDS-PAGE and Western blot assay. The findings provide the basis for the preparation of monoclonal antibody and function research of ORF049L.

关 键 词：虹彩病毒 跨膜蛋白 原核表达 

分 类 号：S941.41[农业科学—水产养殖]