PDCD4重组慢病毒载体的构建、包装及其对前列腺癌细胞增殖的影响  

作　　者：张克克[1] 张小芳[2] 王福利[1] 张翔[2] 武国军[1] 王磊[2] 杨安钢[3] 张瑞[2] 袁建林[1] 

机构地区：[1]第四军医大学西京医院泌尿外科,陕西西安710032 [2]第四军医大学生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710032 [3]第四军医大学免疫学教研室,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2013年第6期609-612,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金(30872583)

摘　　要：目的构建表达程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的前列腺癌PC3细胞亚株。研究PDCD4分子对前列腺癌细胞增殖的影响。方法利用PCR扩增PDCD4编码区片段,克隆入pENTRA-3C入门载体,利用LR clonaseⅡ重组酶将目的基因片段转接入pLenti-6.3慢病毒表达载体并包装相应的慢病毒,以表达红色荧光蛋白mCherry的pLenti-6.3-mCherry慢病毒载体包装的慢病毒为对照,感染人前列腺癌PC3细胞,通过杀稻瘟素(blasticidin)筛选出能够稳定过表达PDCD4蛋白的细胞亚株。利用Western blot法检测PDCD4蛋白的表达量,MTT法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化。结果构建了重组慢病毒载体pLenti6.3-PDCD4。利用重组慢病毒表达系统筛选稳定过表达PDCD4蛋白的细胞亚株,并用Western blot法进行了验证。MTT法及平板克隆形成实验结果显示PDCD4高表达的PC3细胞亚株的增殖能力受到抑制。结论成功构建了表达PDCD4分子的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达PDCD4的PC3细胞株。过表达的PD-CD4分子可以显著抑制PC3前列腺癌细胞的增殖。

关 键 词：PDCD4 慢病毒 前列腺癌 细胞增殖 

分 类 号：R392.12[医药卫生—免疫学] R737.25[医药卫生—基础医学]