动脉粥样硬化患者单个核细胞Siglec-1在促进CD4＋和CD8＋T淋巴细胞增殖和分泌细胞因子中的作用  

The role of monocytes Siglec-1 in stimulating CD4＋ and CD8＋ T cells proliferation and activation in atherosclerosis

作　　者：熊怡淞[1] 李畅[2] 俞娟[2] 仲人前[2] 

机构地区：[1]成都军区总医院实验医学研究与保障中心,610083 [2]第二军医大学长征医院实验诊断科

出　　处：《中华检验医学杂志》2013年第5期414-419,共6页Chinese Journal of Laboratory Medicine

基　　金：国家高技术研究发展计划（863计划）资助项目（2006AA022496）;国家自然科学基金资助项目（81072479、81170263）;上海市科学技术委员会优秀学科带头人基金资助课题（07XD14013）;成都军区总医院院管课题资助项目（2011YG-C05）

摘　　要：目的探讨动脉粥样硬化（As）患者单个核细胞（PBMC）唾液酸黏附素（Sig1ec-1）在刺激白细胞分化抗原（CD）4＋和CD8＋T淋巴细胞活化增殖中的作用。方法实验研究。用磁珠分离长征医院18例急性冠状动脉综合征（ACS）和41例稳定型心绞痛（sA）患者及32名健康对照者CD14阳性PBMC后，用不同浓度α-干扰素（IFN—α，0、2、5、10ng／m1）刺激Sig1ec-1高表达，或用小干扰RNA或抗Sig1ec-1单抗靶向抑制Sig1ec-1表达，再与1名第三方健康献血者CD4＋／CD8＋T淋巴细胞共培养5d。然后，将实验分为11组：健康人CD14（1组），健康人CD14＋IFN-α 5rig／m1（2组），健康人CD14＋IFN-α5ng／m1＋anti—Sig1ee-12μg／ml（3组），ACSCD14（4组），ACSCD14＋siRNA干扰对照组（Mock，5组），ACSCD14＋siRNA67940nmo]／L（6组），ACSCD14＋anti—Sig]ee-12μg／m1（7组），SACD14（8组），SACD14＋Mock（9组），SACD14＋siRNA67940nmo1／L（10组），SACD14＋anti—Sig]ec-12μ∥m1（11组）；每组测定10份标本。用CCK-8活细胞计数试剂盒检测共培养T淋巴细胞增殖，用ELISA检测共培养T淋巴细胞分泌白细胞介素（IL）-2、IL-10、IL-12、1干扰素（IFN-γ）。测定各组PBMC刺激T淋巴细胞分泌细胞因子的计量数据用中位数（四分位数）表示，采用非参数秩和检验。结果靶向阻断Sig1ee一1后（6组），PBMC刺激CD4＋T淋巴细胞及CD8＋T淋巴细胞的增殖能力减弱，PBMC刺激CD4＋T淋巴细胞分泌IL-2、IL-12、IFN-γ分别为67．00（62．50～87．30）、0．86（0～1．63）、47．82（37．60～56．67）pg／m1，且分泌能力减弱；IL-10为56．00（46．25～67．40）pg／m1，且分泌能力增强；未处理组（4组）上述细胞因子分别为213．70（187．50～275．30）、6．87（4．90～8．93）、114．90（89．50～167．40）、21．08（15．70～33．20）pg／m1，二者差异有统计学意义（U值分别为8．50、17．00、8．50、87Objective To investigate the role of atherosclerotic monocytes Siglec-1 in stimulating CIM ＋ and CD8 ＋ T lymphocytes proliferation and activation. Methods Experimental research. Cluster of differentiation antigen 14 （CD14） positive monocytes of 18 acute coronary syndrome （ACS）, 41 stable angina （SA） and 32 healthy volunteers were separated by magnetic-activated cell sorting. Different concentration of interferon-α（IFN-α, 0, 2, 5, 10 ng/ml） were used to up-regulate Siglec-1 and small interfering RNA （siRNA） or blocking antibody were used to down-regulate Siglec-1. Then monocytes were cocuhured with CD4 ＋ T/CD8 ＋ T cells from a third healthy volunteer for 5 days. The experiment was designed for 11 groups （n = 10 for each group） , that was （1） normal CD14, （2） normal CD14 ＋ IFN-α 5 ng/ml, （3） normal CD14 ＋ IFN-α 5 ng/ml ＋ anti-Siglec-1 2 μg/ml, （4） ACS CD14, （5） ACS CD14 ＋ control siRNA group （Mock） , （6） ACS CD14 ＋ siRNA 679 40 nmol/L, （7） ACS CD14 ＋ anti-Siglee-1 2 μg/ml, （8） SA CD14, （9） SA CD14 ＋Moek, （10） SA CD14 ＋ siRNA 679 40 nmol/L and （ 11 ） SA CD14 ＋ anti- Siglec-1 2 μg/ml. Cell Counting Kit-8 （CCK-8） was used to determine T cells proliferation and ELISA was used to deteet Interleukin-2 （ IL-2）, IL-10, IL-12 and IFN-γ of culture supernatant. Data of eytokines detection were expressed as medium （quartiles） and analyzed by nonparametric rank sum test. Results By the blockage of Siglee-1 （group 6） , the proliferation of CD4 and CD8 were decreased. Seeretion of IL-2, IL-12 and IFN-＇y by CD4 eells [67.00（62. 50-87.30）, 0. 86（0-1.63）, and 47.82（37.60-56. 67） pg/ml, respeetively] were deereased and IL-10 [56. 00（46. 25-67.40） pg/ml] was increased compared with those in control group [ group 4, 213.70 （ 187.50-275.30 ） , 6. 87 （4. 90-8.93 ） , 114. 90 （ 89. 50-167.40 ）, and 21.08 （15.70-33.20） pg/ml, respectively, with U -- 8.50, 17. 00, 8.50, and 87.50, respect

关 键 词：动脉粥样硬化 唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1 T淋巴细胞 细胞增殖 细胞因子类 

分 类 号：R543.5[医药卫生—心血管疾病]