人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达  

High expression of human TPO in Escherichia coli

作　　者：邢桂春[1] 张津辉[1] 魏汉东[1] 陈惠鹏[1] 柳晓兰[1] 邱丽玲[1] 贺福初[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院放射医学研究所,北京100850

出　　处：《军事医学科学院院刊》2000年第3期177-180,183,共5页Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences

基　　金：国家自然科学基金!资助项目 (396 2 0 5 14 );国家"八六三"高技术基金!资助项目 (86 3 10 2 0 8 0 5 )

摘　　要：目的 :人血小板生成素 (TPO)在大肠杆菌中的高效表达。方法 :利用PCR技术 ,扩增出了( 1～ 174个氨基酸的 )人血小板生成素cDNA ,并将其克隆到pGEX 1λT载体中 ,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定 ,表达产物经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)。结果 :限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的 ( 1～ 174氨基酸 )TPOcDNA片段 ;表达产物经SDS PAGE相对分子质量约为 4 30 0 0 ,与预期的相符合 ,表达占可溶性菌体总蛋白的 4 4 .56%。结论 :表达产物具有明显的刺激Mo7e细胞增殖与CFU Meg生成的功能。Objective: To study the high expression of human TPO in E.coli. Methods:PCR amplification method was used to obtain human TPO cDNA containing 1-174 amino acid codons. Then hTPO cDNA was cloned in pGEX-1λT vector and the expression plasmid of fusion protein was constructed. Results:Cleavage with restriction eudonuclease showed that the recombinant contained the cDNA encoding hTPO. The MW of expression product was about 43 000, consistant with that expected. The expression product was 44.5% of the total bacterial soluable proteins. Conclusions: The expressed product stimulates proliferation of Mo7e cell lines and formation of CFU-Meg. [

关 键 词：人血小板生成素 血小板减少症 大肠杆菌 PCR 

分 类 号：R378[医药卫生—病原生物学]