大肠杆菌原核增强子样序列的克隆及其结构与功能的研究  

Functional and Structural Analysis of A Prokaryotic Enhancer like Element in Escherichia coli MC1061 Strain

作　　者：朱民[1] 吴淑华[1] 秘晓林[1] 薛水星[1] 韩峰[1] 

机构地区：[1]中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室,北京100052

出　　处：《生物工程学报》2000年第1期27-30,共4页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家高技术研究发展计划项目

摘　　要：利用氯霉素乙酰转移酶(cat)以及β半乳糖苷酶(lacZ)基因作为报告基因,从大肠杆菌MC1061株染色体基因组中克隆到3个原核增强子样序列———MC2,MC8,MC9,这3个片段均具有正反向增强活性,对β半乳糖苷酶基因的增强活性(正向)在2～55倍之间。采用体内转录,RNADotblot杂交的方法对MC8的功能进行了研究,结果表明,MC8片段对于基因表达的调控发生在转录水平上。用核酸外切酶III末端缺失的方法对MC8的功能区进行了定位。结果显示,MC8的功能区位于距其正向克隆5′端450～950bp长约500bp的区段内。在450～600bp以及840～950bp区段内至少分别含有一个功能位点。序列分析的结果表明,MC8功能区有3个AT丰富区,其中2个分别位于450～600bp以及840～950bp区段内。Cat and lac Z genes were used as reporter gene and three prokaryotic enhancer like element (MC2,MC8 and MC9)were identified in the genomic DNA of MC1061 strain.All three fragments can improve the expression of lac Z gene by 2～5 times with the orientation independence.The results of in vivo transcription and Dot blot hybridization assays suggested that MC8 regulated the expression of lac Z at transcription level.Stepwise deletion expreriments showed the functional domain of MC8 located at 450～950bp, and in regions 450～600bp and 840～950bp contain at least one functional loci.Sequence data indicated three are 3 A+T rich sections in MC8,2 of them are in the functional loci.

关 键 词：大肠杆菌 原核增强子样序列 基因调控 结构 功能 

分 类 号：Q503[生物学—生物化学]