VEGF165慢病毒载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞中的表达  

作　　者：赵成利[1] 梁瑜[1] 谢文斌[1] 张立[1] 王冕[1] 匡斌[1] 邓国三[1] 

机构地区：[1]广东省人民医院(广东省医学科学院)整形外科,广州510080

出　　处：《中华显微外科杂志》2013年第4期364-366,共3页Chinese Journal of Microsurgery

基　　金：广东省科技计划项目（编号20118061300035）

摘　　要：目的构建VEGF165慢病毒包装质粒，通过慢病毒介导VEGFl65感染人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）并验证其表达情况，为高表达VEGF的HBMSCs应用于血管再生和治疗临床创面愈合提供研究基础。方法2012年3月至2013年3月，采用聚合酶链式反应（PCR）从提取的人体组织总RNA逆转录扩增VEGFl65，经双酶切后与pLVX—IRES—ZsGreenl真核载体连接，在脂质体介导下将重组质粒转染293T细胞，包装产生的病毒液感染HBMSCs，荧光显微镜下观察VEGF165荧光融合蛋白表达，采用实时荧光定量PCR（qRT．PCR）检测VEGFl65mRNA的表达。对结果用SPSS13．0统计软件进行分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果双酶切产物于576bp处出现特异性条带，测序结果与预期符合，表明所构建重组质粒pLVX—IRES—ZsGreenl＋VEGF165结构正确。构建质粒转染293T细胞并产生高滴度含目的基因VEGF165的慢病毒，感染hBMSCs后，细胞在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达，qRT—PCR结果显示慢病毒感染组VEGFl65mRNA表达水平为32．27±1．05，显著高于对照组（P〈0．05）。结论成功构建VEGF165慢病毒包装质粒，并感染hBMSC，为其基因治疗应用于临床提供了依据。

关 键 词：血管内皮细胞生长因子 慢病毒 人骨髓间充质干细胞 

分 类 号：R329[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]