利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型  

Analysis of N-glycosylated protein and N-glycans in human plasma byhydrophilic enrichment strategy

作　　者：马成[1,2] 潘一廷[1,2] 张琪[3] 王继峰[2] 钱小红[1,2] 应万涛[2] 

机构地区：[1]北京理工大学生命学院,北京100081 [2]蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京102206 [3]新加坡南洋理工大学生命学院,新加坡637551

出　　处：《色谱》2013年第11期1057-1063,共7页Chinese Journal of Chromatography

基　　金：国家重点基础研究“973”项目(2011CB910603);国家高技术研究发展计划项目(2012AA020203);北京市科技新星计划项目(Z121107002512014)

摘　　要：蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率。本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型。在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8%)。本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段。N-glycosylation of proteins is one of the most important post-translational modifications （PTM）.Many diagnostic biomarkers and therapeutic targets are glycosylated proteins.However,it is still a big challenge to identify glycoproteins in human plasma,because of the high dynamic range and microheterogeneity of glycosylation.In this work,hydrophilic interaction liquid chromatography （HILIC） enrichment,high-pH reversed-phase prefractionation and high accurate mass spectrometry （MS） analysis were combined to profile the N-glycoproteins in human plasma.In total,637 N-glycosites from 299 glycoproteins （protein groups） were identified.There were also 31 glycoforms recognized after HILIC enrichment and MS analysis.Among the results,107 glycosylation sites （16.8%） are newly found.This study provided a simple and reliable strategy for exploring potential N-glycoprotein biomarkers from complicated biological systems.

关 键 词：超滤辅助样品制备 亲水相互作用色谱 反相色谱 N-糖基化蛋白 N-糖 

分 类 号：O658[理学—分析化学]