中麻黄ISSR-PCR反应体系的建立和优化  

Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Ephedra intermedia

作　　者：朱田田[1,2,3] 晋玲[1,2] 杜弢[1,3] 崔治家[1,2] 林丽[1] 高天鹏[4] 张裴斯[1] 

机构地区：[1]甘肃中医学院,兰州730000 [2]甘肃省高校中(藏)药化学与质量研究省级重点实验室,兰州730000 [3]甘肃中医学院药用植物遗传育种研究所,兰州730000 [4]兰州城市学院城市生态与环境生物技术中心,兰州730070

出　　处：《中国药房》2013年第43期4033-4037,共5页China Pharmacy

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.31160118);甘肃省教育厅科研项目(No.1106B-07);甘肃中医学院中青年科研基金资助项目(No.ZQ2011-12)

摘　　要：目的:建立适用于中麻黄的简单重复序列区间-聚合酶链反应(ISSR-PCR)最佳反应体系。方法:以凝胶成像系统下特异谱带特征为评价指标,以Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板为考察因素,采用L16(45)正交试验优选条件;通过单因素试验对反应体系中各种影响因素进行筛选。结果:中麻黄ISSR-PCR最佳反应体系(20μl)为30 ng DNA模板、0.25 mmol/L dNTPs、2.0 mmol/L Mg2+(10×PCR Buffer)、0.4μmol/L ISSR引物、1.5 U Taq DNA聚合酶;并筛选出了12条ISSR-PCR引物的最佳退火温度。结论:所建中麻黄ISSR-PCR反应体系经过10份中麻黄材料检验证明该体系稳定可靠,可用于中麻黄遗传分析。OBJECTIVE： To establish optimal ISSR-PCR reaction system for Ephedra intermedia. METHODS： The reaction system was optimized by L18（4^5） orthogonal test with specific bands under gel imaging system as index using Mg2＋, dNTPs, Taq DNA polymerase and primer, DNA template as factors. The influential factors of reaction system were screened by single factor test. RESULTS： The optimal ISSR-PCR reaction system of E. intermedia（20 μl） contained 30 ng DNA template, 0.25 mmol/L dNTPs, 2.0 mmol/L Mg2＋（10×PCR Buffer）, 0.4 μmol/L ISSR primer and 1.5 U Taq DNA polymerase. The suitable annealing tem- perature of 12 primers was determined. CONCLUSIONS： It is proved that the established ISSR-PCR reaction system of E. interme- dia would be stable and credible by the materials testing result of 10 samples of E. intermedia. This would provide the basis for the genetic analysis of E. intermedia.

关 键 词：中麻黄 ISSR反应体系 建立 优化 

分 类 号：R285[医药卫生—中药学] Q291[医药卫生—中医学]