利用琼脂磁珠作为载体建立快速HIV-P24核酸适配体的筛选方法  

作　　者：李志忠[1] 马瑾[1] 王芳[2] 廖世奇[2] 马宁[3] 杨楠[4] 

机构地区：[1]兰州理工大学生命科学与工程学院 [2]甘肃省医学科学研究院医学分子生物学研究中心 [3]兰州大学生命科学学院 [4]西北师范大学生命科学与工程学院

出　　处：《中国食品工业》2013年第11期49-52,共4页China Food Industry

基　　金：《同时检测HIV抗原（P24）和基因降低窗口期的基础研究》;项目编号：30960104.

摘　　要：目的：利用磁珠作为载体，建立快速HIV-P24核酸适配体的SELEX筛选方法。方法：利用SELEX技术、磁珠分离及实时定量PCR技术，从随机寡核苷酸库中快速筛选出能与HIV-P24特异结合的寡核苷酸，利用凝胶阻滞实验鉴定所筛选到的HIV-P24核酸适配体复合物，通过连接Pmd18-Tvector，转化E.ColiDH5a感受态细胞得到了阳性克隆。结果：经过4轮筛选并运用凝胶阻滞实验验证了HIV-P24核酸适配体复合物条带明显被阻滞，利用交错PCR鉴定了所挑取的阳性克隆，也得到了测序序列。结论：利用SELEX技术、磁珠核酸分离技术和实时定量PCR技术成功筛选到了2条能与HIV-P24特异性结合的核酸适配体，这几种方法相结合操作简单、能有效提高筛选效率，并且便于机械化操作，为今后的适配体筛选打下良好基础。

关 键 词：磁珠 SELEX技术 实时定量PCR HIV-P24 核酸适配体 

分 类 号：Q52[生物学—生物化学]