兔透明带蛋白ZPB(RC55)DNA疫苗PCMV4-RC55的构建及其在兔的免疫反应  

The construction of PCMV4-RC55 as DNA vaccine of rabbit zona pellucida glycoprotein ZPB(RC55) and inoculation in rabbits to elicit the immune response

作　　者：陈云[1] 杨颖[1] 刘喆[1] 张富春[2] 陈幼珍[1] 王宾[3] 彭景楩[1] 

机构地区：[1]中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室,北京100080 [2]新疆大学生物系,乌鲁木齐830046 [3]美国宾夕法尼亚大学医学院病理学系

出　　处：《生殖医学杂志》2000年第6期329-333,共5页Journal of Reproductive Medicine

基　　金：澳大利亚脊椎动物生物控制研究中心合作项目;创新工程部分资助

摘　　要：本实验以兔 ZPB作为免疫抗原 ,利用 DNA疫苗技术进行兔免疫避孕疫苗的研究。利用 Eco RI内切酶将 PGEM-RC5 5的兔 ZP基因 RC5 5亚克隆至 p Bluescript载体 ,再经 Hind III/ Xbal双酶切后 ,将 RC5 5基因构建至真核表达质粒载体 PCMV4,得到PCMV4-RC5 5。在 PCMV4-RC5 5 DNA疫苗免疫新西兰兔的实验中 ,设雌兔实验组及雄兔实验组 ,以 Bupivacaine-HCL为辅助剂进行大腿肌肉注射 ,2 4h后在相同部位注射 2 5 0μg PCMV4-RC5 5 DNA,并在第 4周免疫加强一次。分别于注射 PCMV4-RC5 5前及注射后第 2、4、5、6、7、8周耳静脉取血 ,收集血清 ,采用 EL ISA法检测新西兰兔产生抗 ZP-RC5 5抗体水平。检测结果表明 ,PCMV4-RC5 5 DNA疫苗能诱导雌兔和雄兔产生免疫应答 ,抗体滴度最高可达 1∶ 80 0 0 ,滴度维持在 1∶ 40 0 0水平能持续两个月以上。To construct the PCMV4-RC55 DNA vaccine of rabbit zona pellucida glycoprotein ZPB(RC55) and to determine the immune responses in rabbits inoculated with PCMV4-RC55 DNA vaccine. Methods: The molecular clone technology was used to construct PCMV4-RC55 DNA vaccine, and ELISA was used to detect the immune responses. Results and Conclusion: The desired recombinant eukaryotic expression vector PCMV4-RC55, with desired full-length cDNA of RC55 was successfully constructed.The immune response in rabbits was evoked by the PCMV4-RC55 DNA vaccine and the titer of anti-RC55 antibody could last for more than two months.

关 键 词：透明带蛋白RC55 DNA疫苗 PCMV4-RC55 免疫避孕 

分 类 号：R169.41[医药卫生—公共卫生与预防医学]