PRNP基因SYBR GreenⅠ双标准曲线法荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用  被引量:5

Development and primary application of double-standard curves method of a real-time fluorescent quantitative PCR assay for detection of PRNP

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作  者:艾文娜[1] 吴润[1,2] 刁小龙[1] 

机构地区:[1]甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070 [2]中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州730046

出  处:《中国兽医科学》2013年第12期1240-1245,共6页Chinese Veterinary Science

基  金:国家自然科学基金项目(31160510);甘肃省自然科学研究基金计划项目(1107RJZA198)

摘  要:为建立双标准曲线法荧光定量PCR检测方法,以PRNP为目标基因、β-actin为内参基因进行扩增,将扩增产物连入pMD18-T载体,获得阳性标准品进行定量扩增。并将MDV标准毒株MD5、疫苗株CV1988和1株野毒株接种CEF,收集不同日龄病变细胞以提取RNA,用以上方法进行扩增。把结果代入标准曲线公式进行计算,分析PRNP基因表达与MDV致瘤的相关性。结果显示,该方法能检测出的PRNP基因和β-actin基因的最低拷贝数为1×103,特异性和重复性较好。相对于对照组,接种3株毒株的PRNP的表达量都有明显的差异。表明MDV的感染对PRNP的表达量确实存在影响。据此推测PrPC对MDV的感染可能发挥着重要的生理功能。To develop double-standard curves method o{ RT-PCR, PRNP was used as target gene and /9-actin used as reference gene. The assay comprised of amplifying cDNAs template generated from viral RNAs of MDS,CV1988 and a wild stain, and establishment of standard curves using in vitro transcribed PRNP and jg-actin RNAs. The result showed that the test had a detection limit as low as 1 X 103 copies//xL with good specificity and repeatability. Compared with the control group,the expression of PRNP in the 3 strains had obvious differences. The result indicated that there was a relationship between MDV infection and expression levels of PRNP,and PrPC may play an important physiological role in MDV infection.

关 键 词:PRNP基因 双标准曲线法 实时荧光定量PCR 

分 类 号:S852.659.7[农业科学—基础兽医学]

 

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