辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制的实验研究  

Simvastatin attenuates oxidized low density lipoprotein induced oxidative stress in human umbilicalvein endothelial cells via downregulating NADPH oxidase activity

作　　者：张磊善[1] 郭锐[2] 崔立宝 

机构地区：[1]湖南省石门县人民医院临床药学室张磊善 湖南省常德市第一人民医院儿科,415300 [2]湖南省常德市第一人民医院儿科 [3]湖南省衡阳市中心医院药剂科

出　　处：《中华心血管病杂志》2014年第1期43-47,共5页Chinese Journal of Cardiology

摘　　要：目的观察辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白（oxidizedlow-densitylipoprotein，OX-LDL）诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用，并初步探讨其机制。方法体外分离培养人脐静脉内皮细胞后分为6组，分别是对照组、OX-LDL处理组（OX．LDL组）、辛伐他汀溶剂＋OX-LDL组（溶剂对照组），辛伐他汀0．1μmoL／L＋OX-LDL组、辛伐他汀0．5μmol／L＋OX-LDL组和辛伐他汀1．0μmol／L＋OX-LDL组。OX-LDL处理组直接给予OX-LDL（120¨μg/ml）刺激24h。辛伐他汀＋OX-LDL组分别采用不同浓度的辛伐他汀（O．1、0．5和1．0μmoL）预先孵育人脐静脉内皮细胞30min，再给予OX-LDL（120μ/m1）刺激24h。荧光分光光度法测定胞内活性氧簇（ROS）的水平。化学发光法测定胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NADPH氧化酶）活性。RT-PCR测定NADPH氧化酶亚基p22pbox、gp91pbox、p47phox、和p67PhmRNA的表达水平。免疫共沉淀以及免疫印迹方法测定p47phox与p22pbox（p47phox／p22phox）的蛋白结合量。结果OX-DL组ROS水平和NADPH氧化酶活性均显著高于对照组[分别为1．507±0．048比0．442±0．021（P〈0．01）和（87．90±10．34）RLU·S。-1·mg-1比（38．52±4．20）RLU·s～·mg。（P〈0．01）]，p22phox、gp91phox、p47phox和p67ph和mRNA水平亦均显著高于对照组（P均〈0．01），p47phox／p22phox蛋白结合量亦显著高于对照组[（292±12）％比100％，P〈0．01]。辛伐他汀不同浓度＋OX-LDL各组ROS水平和NADPH氧化酶活性随着辛伐他汀浓度的增加而降低，组间差异均有统计学意义（P均〈0．05），且均低于OX-LDL组（P〈0．05或0．01）。辛伐他汀1．0p,molμmol/L＋OX-LDL组p22ph“、gp91phox、p47ph“和p67pn“mRNA水平均显著低于OX．LDL组（P均〈0．05），p47phox／p22phox蛋白结合量亦显著低于OX-LDL组[（117±9）％比（292±12）％，P〈0．01]。结论辛伐他汀可能通过降低NADPH氧化酶活Objective To investigate the effects and related mechanism of simvastatin on oxidized low density lipoprotein （ox-LDL） induced oxidative stress in human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）. Methods HUVECs were cultured in 6 different culture media： control,ox-LDL, ox-LDL ＋ vehicle, ox-LDL ＋ 0. I μmol/L simvastatin, ox-LDL ＋ 0. 5 μmol/L simvastatin, ox-LDL ＋ 1.0 μmol/L simvastatin. HUVECs were incubated with ox-LDL （ 120 μg/ml ） for 24 h in the presence or absence of different concentrations of simvastatin （ 0, 1,0. 5, 1.0 i.Lmol/L ） . The fluorescence intensity for reactive oxygen species （ROS） in HUVECs was measured by a laser confocal scanning microscopy and a microplate reader. NADPH oxidase activity was measured by lucigenin chemiluminescence, p22phox, gp91phox, p47phox and p67phox mRNA expression of HUVECs post various treatments was detected by RT-PCR. p22phox immunoprecipitates were immunoblotted for phox and total o22phox levels to indentifv 47Phphox/n22Phphoxinteraction. Results Simvastatin attenuated ox-LDL induced ROS generation and NADPH oxidase activity in a concentration dependent manner （ all P 〈 0. 05 ）. In addition, simvastatin significantly downregulated mRNA expression of p2phox, gp91rphox, io47phox and p67Ph＂~ （all P 〈 0. 05）, as well as the interaction of p47phox/p22phox（P 〈 0. 01 ）. Conclusions Simvastatin is an important regulator on NADPH subunits mRNA expressions and p47phox/p22phoxinteraction. Simvastatin attenuates ox-LDL-indueed oxidative stress in HUVECs via reducing NADPH oxiclase netlvitv

关 键 词：内皮细胞 斯伐他汀 脂蛋白类 LDL 氧化性应激 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学]