dsRNA诱导应激颗粒形成的研究  

Study on stress granule formation induced by dsRNA

作　　者：张佩芬[1] 刘静宇[2] 张萍[1] 何军芳[1] 

机构地区：[1]中山大学中山医学院,广东广州510080 [2]广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州510623

出　　处：《热带医学杂志》2014年第1期1-3,F0003,共4页Journal of Tropical Medicine

基　　金：国家自然科学基金(81171576;81261160323);中央高校基本科研业务费专项资金资助

摘　　要：目的探索病毒感染产生的中间产物双链RNA（dsRNA）分子刺激对细胞形成应激颗粒（sG）的影响，为进一步研究病毒诱导与拮抗SG形成的分子机制提供实验依据。方法采用不同长度的dsRNA，包括长链（HMW，1．5～8kb）、短链（LMW，0．2-1kb）以及小分子dsRNA（19bp），分别转染A549细胞，模拟病毒感染产生的应激压力。通过免疫荧光检测形成sG的细胞百分率，以及蛋白免疫印迹（WB）检测不同长度的dsRNA诱导抗病毒激酶蛋白激酶R（PKR）及其底物elF2α的活化水平。结果HMW、LMWdsRNA可诱导A549细胞产生sG，而小分子dsRNA并不能诱导sG产生。免疫印迹结果发现HMW、LMWdsRNA可诱导PKR和下游底物eIF2α的磷酸化，而小dsRNA不足以活化PKR。结论病毒可能通过降解其dsRNA避免PKR的激活和sG形成，从而逃逸宿主应激应答。Objective Our study aims to investigate impacts of double-stranded RNA （dsRNA） of different lengths on stress granule （SG） formation and to explore the underlying mechanism. Methods A549 cells were transfected with dsRNA of different lengths, including HMW （height molecular weight, 1.5-8 kb）, LMW （light molecular weight, 0.2-1 kb）, and small dsRNA （19 bp）. Immunofluorescence staining microscopy was performed to detect the SG formation. Activation of protein kinase R （PKR） and eukaryotic initiate factor 2c~ （eIF2ct） were determined by Western blot using the antibodies specific detecting their phosphorylated forms. Results SG was induced in A549 cells transfected with HMW and LMW dsRNA, hut not with small dsRNA. Phosphorylation of PKR and cIF2a were detected in cells transfeeted with HMW and LMW dsRNA, but not with small dsRNA. Conclusion These data suggest that minimizing dsRNA length might be a strategy for virus to keep PKR inactive and to escape SG formation.

关 键 词：应激颗粒 双链sRNA 蛋白激酶R 

分 类 号：R373.9[医药卫生—病原生物学]