石斛属植物ISSR扩增体系的建立与优化  

Establishment and Optimization of ISSR Reaction System for Dendrobium

作　　者：陈美霞[1] 朱文宁 孙焕[1] 魏日凤[3] 刘伟[1] 

机构地区：[1]宁德师范学院,福建宁德352100 [2]福建仙洋洋食品科技有限公司,福建宁德352100 [3]福建农林大学,福州350002

出　　处：《中国农学通报》2014年第10期177-181,共5页Chinese Agricultural Science Bulletin

基　　金：福建省高校新世纪人才资助项目"炭疽菌ITS区序列研究及抗炭疽病相关基因的克隆和功能分析"(JK2011060);宁德师范学院服务海西重大项目"野牡丹属等观赏种质资源及其开发利用研究"(2010H104);福建省宁德师范学院人才引进项目"石斛属植物种质资源遗传多样性分析";福建省农业五新工程项目"茶主要病害防治及生态茶园建设新技术示范推广";福建省农科教项目"茶炭疽病轮斑病等主要病害的生物学特性及拮抗菌筛选与应用示范推广";福建省科技厅自然科学基金项目"石斛属植物种质资源遗传多样性的SRAP;SSR分析"(2012J05060);福建省科技计划重点项目"闽台两岸农业新兴产业合作与竞争力提升发展研究"(2012R0068)

摘　　要：旨在建立并优化石斛属植物的ISSR-PCR反应体系。通过对ISSR-PCR反应体系中主要影响因子模板DNA、dNTP、10×PCR Buffer、引物以及Taq DNA聚合酶分别进行单因素优化,最终建立一套适用于石斛属植物的扩增多态性高、稳定性强、带型清晰的ISSR最佳反应体系。20μL反应体系的适宜浓度及用量分别为:模板DNA 10 ng/μL 3μL,dNTP 2.5 mmol/L 1.5μL,10×PCR Buffer 3.0μL,引物4μmol/L3.5μL,TaqDNA聚合酶5 U 0.2μL。这一优化体系适用于石斛ISSR分析,为今后遗传多样性与亲缘关系分析、连锁图谱构建、QTL定位、基因定位与克隆等方面的研究提供了技术支撑。The research aimed to establish and optimize a stable ISSR-PCR reaction system for Dendrobium. In this paper, the key factors of ISSR-PCR reaction system including DNA template concentration, dNTP, 10× PCR Buffer, primer concentration, DNA Taq polymorphism were investigated and optimized. The stable reaction system could amplify high levels of polymorphism, good repeatability and clear band patterns. ISSR system （total volume of 20 μL） established was as follows： template DNA 10 ng/μL 3μL, dNTP 2.5 mmol/L 1.5 μL, 10×PCR Buffer 3.0 μL, primer 4 μmol/L 3.5 μL, Taq polymorphism 5 U 0.2 μL. It showed that the optimized system in this experiment could be applied in the ISSR analysis for Dendrobium. This research provided technical support for genetic diversity and genetic relationship research, linkage map construction, QTL location, gene mapping and gene cloning and so on.

关 键 词：石斛 ISSR标记 建立与优化 

分 类 号：S326[农业科学—作物遗传育种]