慢病毒载体PLK O.1-shHIF-2α的构建及鉴定  

作　　者：刘鹏飞[1,2] 崔春萍[3] 门同义[4] 

机构地区：[1]山东省医学科学院,济南250021 [2]济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院 [3]军事医学科学院放射与辐射医学研究所 [4]山东省千佛山医院

出　　处：《山东医药》2014年第14期32-34,共3页Shandong Medical Journal

摘　　要：目的构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的干涉缺氧诱导因子(HIF)-2α表达的慢病毒载体,并对所得产物进行鉴定。方法体外合成的单链HIF-2α干涉片段经过退火后形成的双链片段和以质粒PCDH为模板扩增出的EF1-EGFP均与PLKO.1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒PLKO.1-shHIF-2α,后者与pMD2G,pSAX2共转染293FT细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒。用其感染786-0细胞,检测细胞中GFP表达情况。结果成功扩增出干涉HIF-2α片段和EF1-EGFP片段,酶切鉴定及测序均证实PLKO.1-shHIF-2α质粒构建成功。转染293FT细胞产生的重组慢病毒颗粒感染786-0细胞后高表达绿色荧光。结论成功构建了高效的带GFP报告基因并稳定干涉HIF-2α表达的慢病毒载体。

关 键 词：肾细胞癌 缺氧诱导因子-2Α 绿色荧光蛋白 RNA干扰 

分 类 号：Q291[生物学—细胞生物学]