猪流行性腹泻病毒变异株N基因的克隆及原核表达  

作　　者：孙冰[1] 李彬[2] 何孔旺[2] 郭容利[2] 倪艳秀[2] 俞正玉[2] 姜平[1] 

机构地区：[1]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095 [2]江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014

出　　处：《畜牧与兽医》2014年第5期72-76,共5页Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：江苏省农业科技自主创新资金[CX(13)3069]

摘　　要：猪流行性腹泻病（Porcine epidemic diarrhea,PED）是我国猪群近两年的多发疾病。本试验于2012年在安徽分离到一株猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）AH2012。为研究该变异株N基因的特性,采用RT-PCR方法获得了其N基因片段,经测序后与其他代表性的PEDV基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,发现该毒株与近年来在我国流行的几株PEDV变异株同源性在99.3~99.5%之间,进化分析显示该毒株属于目前流行的PEDV变异株。将其克隆到表达载体pET28a（＋）中,构建了重组质粒pET28a-N,经测序鉴定正确后,转化至感受态细胞BL21（DE3）中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为65 ku的融合蛋白,蛋白表达量较高,蛋白免疫印迹结果显示,表达的N蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性的免疫反应,表明原核表达的N蛋白具有良好的反应原性。该研究可为猪流行性腹泻病的流行病学调查、诊断与防控方法的建立奠定基础。

关 键 词：猪流行性腹泻病病毒 N基因 序列分析 蛋白表达 

分 类 号：S855.3[农业科学—临床兽医学]