利用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达 HIV-1Gag蛋白  

Expression of HIV-1 Gag Protein in Insect cells by Bac-to-Bac System

作　　者：王宏伟[1] 金宁一[1] 龚伟[1] 张应玖[2] 许崇波 秦云龙[1] 金洪涛[1] 邵一鸣 殷震[1] 

机构地区：[1]中国人民解放军军需大学研究所病毒宣解放军基因工程实验室,长春130062 [2]吉林大学生命科学院 [3]国家艾滋病参比实验室

出　　处：《中国生物制品学杂志》2001年第1期14-16,共3页Chinese Journal of Biologicals

基　　金：国家杰出青年基金资助项目(39825119)。

摘　　要：目的在昆虫细胞中表达中国流行株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋白，制备重组 Ｇａｇ蛋白。方法将中国 株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１的 Ｇａｇ全基因序列，克隆到杆状病毒表达载体 ｐｆａｓｔｂａｃＩ中，构建了重组质粒 ｐｆａｓｔＧａｇ。经转座及平板 筛选，提取重组穿梭质粒 Ｂａｃｍｉｄ。经转染Ｓｆ９昆虫细胞后，获得了重组杆状病毒。用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和间接免疫荧光实验分析表达的目的蛋白。结果重组病毒在昆虫细胞 Ｓｆ９中高效表达了中国株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋 白，表达的重组蛋白具有良好的抗原活性，可与ＨＩＶ－１标准阳性血清及ｐ２４单克隆抗体发生较强的免疫反应。结论 重组表达产物可用于艾滋病的免疫诊断和疫苗研究。Objective To express Hiv-1 Gag protein subclass B in insect cells.Methods Recombinant plasmid pfastGag was constructed by inserting the full length of HIV-1 Gag subclass B gene into baculovirus transfer vector pfasbacI.After transforming it into competent E.coli DH10 cells and plate selection,the recombinant shuttle plasmid Bacmid was extracted and transfected to Sf9 cells.In this way,the recombinant baculovirus carrying HIV-1 Gag gene was obtained.The expressed product was confirmed by SDS-PAGE, Western blot and immunofluorescence test. Results The expressed recombinant HIV-1 Gag protein showed good antigenicity. It could be recognized with standard HIV-1 positive serum and anti-HIV-1 p24 McAb. Conclusion The expressed products can be used for the diagnosis of HIV-1 infection and the development of AIDS vaccine.

关 键 词：免疫缺陷病毒 杆状病毒 GAG蛋白 

分 类 号：R373.9[医药卫生—病原生物学]