影响HM—1细胞获得种系嵌合鼠的两种因素  

作　　者：何维[1] 孙方臻[1] 

机构地区：[1]中国科学院发育生物学研究所，中国北京100080

出　　处：《Developmental and Reproductive Biology》1997年第1期17-24,共8页发育与生殖生物学报（英文版）

摘　　要：ES细胞系统与基因定位致变相结合，进行基因敲除（knockout)已成为研究基因在生物体内功能的重要手段。在ES细胞系的建立、外源基因导入ES细胞、种系嵌合鼠的获得等三个重要环节中，种系嵌合鼠的获得是最关键的一环。由于ES细胞系统技术复杂，实验条件要求很高，心管国际上已报导了上百例的基因敲除（knockout)实验，但是到目前为止，我国这无一例在国内条件下获得种系嵌合鼠的正式报道。本研究对影响种系嵌合鼠获得的两种因素（饲养层细胞、受体胚胎种类）进行了比较研究，成功地获得了种系嵌合鼠。将HM－1细胞在STO和MEF培养层上培养至21－33代，注射到不同不鼠囊胚里，经过恢复培养，移植到假孕的昆明白雄鼠子宫内。由于HM－1细胞来源于粟色的129品系，而胚胎供体鼠的毛色为黑或白色，仔鼠出生一周后即可辨别是否为毛色嵌合鼠。用成年嵌合鼠与其受体胚胎相同品系的小鼠交配，进行种系嵌合鼠鉴定。曾有报导：STO培养层会导致ES细胞发生核变。我们改用MEF培养层，获得嵌合鼠的比率高达48．6％（Table1)。不同小鼠胚之间存在差异，C57BL／6J、ICR和昆明白三者提供的受体胚胎产生嵌合鼠的比率分别为71．4％、55％和18％（Table2）。因此C57BL6J品系小鼠胚胎更适于做HM－1细胞的受体胚胎。由于HM－1细胞的染色体组型属于XY型，所获得的嵌合鼠产生明显的性别偏离现象（Table3)，甚至有育现象发生。交配实验表明：两只以C57BL／6J小鼠囊胚为受体胚胎获得的嵌合鼠为种系嵌合鼠，可以进行种系传递，其它嵌合鼠均没有种系传递发生（Fig.1&2)。这两只鼠种系传递的比例为47．4％（Table4）。现在看来，在改用MEF培养层以前，一直认为不能进行种系传递的HM－1细胞是能够嵌合入生殖腺并形成有功能的配子的。

关 键 词：ES细胞系统 科系嵌合鼠 HM-1细胞 

分 类 号：Q813.7[生物学—生物工程]