转化生长因子-β1反义RNA腺病毒载体的构建  

Construction of transforming growth factor beta 1 antisense RNA recombinant adenovirus

作　　者：史伟[1] 刘双信[1] 梁馨苓[1] 丁国印 余细勇[2] 梁永正[1] 杨周灼[1] 

机构地区：[1]广东省人民医院肾内科,广州510080 [2]广东省人民医院心脏病研究所药理研究室

出　　处：《中华肾脏病杂志》2001年第2期105-109,共5页Chinese Journal of Nephrology

基　　金：广东省科学委员会科技攻关重点项目(199710);广东省医药科学技术研究基金资助项目(1997045)

摘　　要：目的 构建含转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）反义ＲＮＡ的重组腺病毒重组体。方法 将ＴＧＦ－β１的 ｃＤＮＡ ５’端６３０ ｂｐ片段反向插入穿梭载体ｐＡｄＴｒａｃｋ－ＣＭＶ，构建为 ＴＧＦ－β１反义 ＲＮＡ的重组体（ｐＡｄＴｒａｃｋ－ａｎｔｉＴＧＦβ１），将重组体ｐＡｄＴｒａｃｋ－ａｎｔｉＴＧＦβ１与包装质粒ｐＡｄＥａｓｙ－１共转染ＢＪ５１８３细菌。用选择培养基筛选同源重组的阳性克隆，同源重组的腺病毒载体转染２９３细胞，在荧光显微镜下观察细胞中的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）及ＰＣＲ扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。结果 构建了含ＴＧＦ－β１反义 ＲＮＡ的重组腺病毒，其滴度为 ２．４ × １０９ＰＦＵ／ｍｌ。结论 该重组腺病毒在治疗肾小球肾炎及肾小球硬化的研究中有一定的应用前景，为肾小球硬化的治疗及研究提供了一种研究手段。Objective To construct transforming growth factor beta 1 (TGF-β) antisense RNA via recombinant adenovirus. Methods Partial cDNA of TGF-β1 was inserted into adenoviral vector pAdTrack-CMV and then was recombinated with packaging plasmid pAdEasy-1 in BJ5 183 bacteria. The adenovirus was generated in human 293 cells via homologous recomhination. A series of methods such as polymerase chain reaction (PCR) and fluorescence microscopy was employed to identify the generated recombinant adenovirus. Results Recombinant TGF-β1 antisense adenoviruses were constructed and the titer of virus was generally up to 2. 4 × 1 09 phaque forming units per milliliter (PFU /ml). Conclusion The recombinant adenovirus may be useful in the research and treatment for proliferative glomerulonephritis and sclerosing glomerulonephritis.

关 键 词：转化生长因子Β 反义RNA 腺病毒载体 基因治疗 肾小球肾炎 肾小球硬化 治疗 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]