极端嗜热古菌——芝田硫化叶菌DNA解旋酶的分离纯化和性质研究  

PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF A DNA HELICASE FROM THE HYPERTHERMOPHILIC ARCHAEON SULFOLOBUS SHIBATAE

作　　者：李昉 郝福英[1] 黄力[2] 

机构地区：[1]北京大学生命科学学院生物化学及分子生物学系,北京100871 [2]中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室,北京100080

出　　处：《微生物学报》2001年第3期340-347,共8页Acta Microbiologica Sinica

基　　金：国家自然科学基金资助项目( 3 9970 0 0 9和 3 992 50 0 1 )&&

摘　　要：采用QSepharose离子交换层析、磷酸纤维素P1 1吸附层析、肝素琼脂糖吸附层析、Su perdex 2 0 0凝胶过滤和PhenylSuperose疏水层析等步骤 ,从嗜酸热芝田硫化叶菌细胞裂解液中分离纯化了一个DNA解旋酶。该解旋酶具有受DNA激活的ATP酶活性。根据SDS PAGE测定结果 ,该酶的分子质量约为 63kD。芝田硫化叶菌DNA解旋酶可以解开底物上 70bp的双链区 ,其解旋活性依赖于双链区旁的单链分叉。该解旋酶的活性依赖于Mg2 + 和ATP的水解 ,在NaCl浓度超过 2 0 0mmol L时受到抑制。该酶的最适pH为 6 7。该酶在 40℃～ 80℃之间均有活性 ,70℃时活性最高。芝田硫化叶菌DNA解旋酶是从古菌中分离得到的第一个天然DNA解旋酶。A DNA helicase from the hyperthermophilic archaeon \%Sulfolobus shibatae\% has been purified to homogeneity by column chromatography on Q Seqharose,phosphocellulose P11,heparin agarose,Superdex 200 and phenyl Superose.The purified enzyme shows DNA\|stimulated ATPase activity.The molecular mass of the enzyme is ～63kD.The \%S.shibatae\% DNA helcase is capable of unwinding a 70bp duplex DNA flanked by unpaired single\|stranded tails at both ends.The helicase activity requires Mg 2+ and hydrolysis of ATP,and is inhibited by NaCl at concentrations greater than 200mmol/L.It has an optimal pH of 6 7.The enzyme is active at temperatures between 40 and 80℃,and the activity peaks at 70℃.The \%S.shibatae\% DNA helicase is the first native DNA helicase to be isolated from archaea.

关 键 词：极端嗜热古菌 芝田硫化叶菌 DNA解旋酶 分离 纯化 性质 

分 类 号：Q55[生物学—生物化学]