U6嵌合型抗caspase-3核酶的体外及体内活性鉴定  

作　　者：徐人欢[1,2] 刘静 徐丰 江舸 谢青[1] 周霞秋[1] 金由辛[3] 王德宝[3] 

机构地区：[1]上海第二医科大学附属瑞金医院传染科 [2]中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海200031 [3]中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室

出　　处：《中国科学（C辑）》2001年第4期353-359,共7页Science in China(Series C)

基　　金：上海市高等学校青年科学基金资助项目(批准号:98QN60);中国科学院重大项目(批准号:KJ951-B1-610)

摘　　要：为探讨ｃａｓｐａｓｅ－３基因在细胞凋亡中的作用，及不同表达核酶的载体在体内的 表达效果，本研究对比了３种表达核酶的真核质粒，包括 ＲＮＡ聚合酶Ⅱ启动的 ｐｌ．５ＲＺ１０７（自我剪切）和ｐＲＺ１０７及ＲＮＡ聚合酶Ⅲ启动的嵌合于Ｕ６中的ｐＵ６ＲＺ１０７在 体外和在肝细胞ＢＲＬ－３Ａ内的活性，以期获得细胞内切割活性较高的的核酶载体方面 的信息．结果显示，具有自我剪切功能的质粒ｐ１．５ＲＺ１０７在体外切割靶ＲＮＡ的效率最 高，几达８０％；而体内ｃａｓｐａｓｅ－３在ＲＮＡ，蛋白水平及蛋白功能活性上均显著下降，证明 核酶在体内均可有效地表达并切割底物，以ｐＵ６ＲＺ１０７切割效率最高，约达６５％， ｐＲＺ１０７次之，ｐｌ．５ＲＺ１０７最低．结果表明，Ｕ６嵌合型核酶ｐＵ６ＲＺ１０７体内可有效地表 达核酶及下调靶ＲＮＡ水平，这不仅为探讨ｃａｓｐａｓｅ－３在凋亡途径中的作用，也可为今后 的基因治疗提供研究基础．

关 键 词：核酶 caspacse-3基因 切割反应 BRL-3A细胞 细胞凋亡 U6嵌合型 体外活性 体内活性 

分 类 号：Q556.9[生物学—生物化学]