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作 者:胡晓芳[1] 魏青青[2] 陈克樱[2] 朱培闳[2] 胡钧[1] 李明乾
机构地区:[1]上海交通大学BioX生命科学中心纳米生物学实验室,上海200030 [2]中国科学院上海生理研究所,上海200031 [3]中国科学院上海原子核研究所纳米切割和纳米操纵实验室,上海200800
出 处:《电子显微学报》2001年第5期579-584,共6页Journal of Chinese Electron Microscopy Society
摘 要:Ryanodine受体 (RyR)是位于细胞内质网膜上的钙释放通道 ,在肌细胞的兴奋 -收缩偶联中发挥重要作用。RyR难于结晶 ,以往主要是用电镜和计算机三维重组相结合的方法来获得其高级结构的信息。由于RyR结构庞大 ,易于水解 ,在提取的过程中需要加入外源性磷脂以保护其结构 ,而磷脂的存在对电镜的分辨率有影响 ,所以电镜研究的RyR在提纯过程中一般不添加外源性磷脂 ,这样得到的结构信息并没有反映RyR在生理状况下的真实情况。我们用原子力显微镜 (AFM)对RyR进行研究 ,经过了空气中RyR成像、液体中RyR成像、重组到脂双层中的RyR研究几个阶段 ,提供了RyR在接近生理条件下的结构信息 。The ryanodine receptor/ calcium release channel, as a membrane protein, is located in the membrane of intracellular Ca 2+ storing organelles, and plays an important role in calcium release. Because of the difficulty in crystallization, knowledge of its conformation is only available from electron microscopy studies. During purification, phospholipid must be added to protect the complex structure of RyR. Because the added phospholipid would lower the resolution of EM image, the RyR sample for the EM lacked extrinsic phospholipid and some deformation indiscernible by EM might be present. We used AFM to investigate the topography of isolated ryanodine receptors of rabbit skeletal musle in air, in liquid and in lipid bilayer. Information of RyR's structure in native state was provided.
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