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作 者:刘利民[1] 邢培清[1] 李建斌[1] 胡军[2] 陈宗德[2] 周育森[3] 王海涛[3]
机构地区:[1]河南省红十字血液中心,郑州450053 [2]河南医科大学微生物与免疫学教研室,郑州450052 [3]中国军事医学科学院微生物与流行病研究所,北京100011
出 处:《河南医科大学学报》2001年第6期703-704,共2页Journal of Henan Medical University
基 金:国家自然科学基金资助项目 3990 0 133
摘 要:目的 :用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原 ,建立诊断TTV感染的特异性方法。方法 :采用PCR方法扩增TTVORF2 基因 ,将之插入到测序质粒载体中进行测序 ,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30 ,并转化大肠杆菌M15菌株 ,进行诱导表达。用SDS PAGE分析表达产物。表达产物经Ni NTA柱层析纯化后 ,得到纯度为90 %的ORF蛋白抗原。用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western BlotBlotting分析。结果 :经IPTG诱导后 ,筛选出 2株高表达株。结论Aim:To explore the expression of TTV recombinant protein antigen in E.coli.Methods:Using PCR to sequence the TTV gene and clone to T vector.The recombinant plasmid was transformed into E.coli strain M15 and induced with IPTG.We purified the specific expressed protein through Ni NTA column,then the purification was analyzed by Western Blotting.Results:The TTV recombinant protein antigen was expressed in E.coli.Conclusion: The recombinan protein antigen can used for diagnosis of TTV infection.
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