GL-7ACA酰化酶表达检测系统的建立  

Establishment of Detective Systems for GL-7ACA Acylase Expression

作　　者：李祥[1] 张伟[1] 茅翔[1] 蔡煊[1] 杨蕴刘[1] 赵国屏[1] 姜卫红[1] 

机构地区：[1]中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海200032

出　　处：《生物工程学报》2001年第6期673-677,共5页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家"8 63"计划资助项目 ( 10 3 13 0 2 0 1)~~

摘　　要：戊二酰 7 氨基头孢烷酸 (GL 7ACA)酰化酶能够催化GL 7ACA分解生成 7 ACA ,后者是工业半合成生产头孢类抗菌素所需的重要前体。为了准确地检测GL 7ACA酰化酶及其突变体的表达 ,本研究通过构建一系列质粒载体 ,建立了两个简便有效地测定GL 7ACA酰化酶基因acy表达量的系统 ,从而可对酶的比活力进行定量。我们将两个报告基因 ,即儿茶酚双加氧酶基因 (xylE)和 β 半乳糖苷酶基因 (lacZ)分别置于acy基因的下游 ,使之与acy基因共用一个启动子 ,进行串联表达 ,各自构成一个多顺反子系统。实验证明 ,基因融合后的儿茶酚双加氧酶或 β 半乳糖苷酶的活力可以间接反映acy的表达量。Glutaryl-7-amino cephalosporanic acid (GL-7ACA)acylase catalyzes the conversion of GL-7ACA to 7-amino cephalosporanic acid (7-ACA).The product 7-ACA is a starting compound for semi-synthetic cephalosporin antibiotics in industry.In order to detect the expression and spesific activity of protein-engineered GL-7ACA acylase accurately,two useful detective systems for its expression has been established,in which reporter genes %xylE% and %lacZ% were fused to the downstream the GL-7ACA acylase gene %acy% respectively and the activity of catechol dioxygenase or β-galactosidase could indicate the amount of acy expression.

关 键 词：GL-7ACA酰化酶 表达 检测系统 头孢菌素类 抗生素 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]