转基因水稻中转录水平cry1Ab基因的沉默及其阶段复活  

作　　者：吴刚[1,2] 崔海瑞[1] 舒庆尧[1] 夏英武[1] 高明尉[1] 吴刚[1,2] 李毅[2] 叶恭银 I.Altosaar 

机构地区：[1]浙江大学原子核农业科学研究所,杭州310029 [2]北京大学蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室 [3]浙江大学植物保护系,杭州310029 [4]Department

出　　处：《中国科学（C辑）》2001年第6期487-496,共10页Science in China(Series C)

基　　金：美国洛克菲勒基金(批准号:2000FS020;RF99001#374);霍英东高校青年教师基金(批准号:71025)资助项目

摘　　要：以田间环境释放条件下农杆菌介导法转化而成的转cry1Ab基因水稻为研究对象,利用GUS组织化学染色法、Western杂交技术,在不抗虫转基因中8215株系后代中筛选到一个无Cry1Ab蛋白表达产物株系.分子杂交结果证实,转基因cry1Ab在中8215株系后代中发生了转录水平沉默,整合过程中基因重排使两个拷贝的ubiquitin启动子同时插入到水稻基因组中.甲基化分析证实ubiquitin启动子区域发生了甲基化,从而导致cry1Ab基因沉默.利用去甲基化试剂5-氮胞苷处理转基因沉默水稻种子,并在苗期、分蘖期、孕穗期、灌浆期及成熟期检测了其对沉默基因的复活效应,结果表明:5-氮胞苷处理使沉默的cry1Ab基因在灌浆期恢复表达活性,复活率约为8％～30％,且以低浓度（45mg/L处理 1,2d）处理的复活率及恢复表达水平较高,复活基因表达的Cry1Ab蛋白最高可达可溶性总蛋白的0.147％.

关 键 词：转基因水稻 CRY1AB基因 基因沉默 基因复活 5-氮胞苷 基因表达 遗传转化技术 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]