检测犬细小病毒和犬瘟热病毒联合PCR/RT-PCR方法的建立及初步应用  

作　　者：修占伍[1] 刘晋宇[1] 李远超 孟媛 鲁承[1] 高旭[1] 

机构地区：[1]延边大学农学院动物医学系,吉林延吉133000

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2019年第3期88-91,共4页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：延边大学科技发展规划项目(602013129)

摘　　要：为了建立一种能同时检测犬细小病毒(CPV)和犬瘟热病毒(CDV)的快速鉴别PCR方法,试验根据GenBank中登录的CPV NS1基因和CDV F基因序列设计2对特异性引物,通过综合CPV单项PCR方法与CDV单项RT-PCR方法的扩增程序,最后确定出联合PCR/RT-PCR方法的最佳退火温度、延伸时间和循环次数等反应程序,并对扩增产物进行克隆鉴定,同时进行特异性试验、敏感性试验和临床病料的检测。结果表明:建立的联合PCR/RT-PCR方法可以在一个扩增体系内同时检测两种病毒,其最佳联合PCR/RT-PCR扩增退火温度为50.8℃;经特异性分析,联合PCR/RT-PCR方法对犬副流感病毒(CPIV)、狂犬病毒(RV)、犬腺病毒(CAV)的检测为阴性;经敏感性分析,联合PCR/RT-PCR方法在模板浓度稀释到1×10~0 TCID_(50)时仍能见到较清晰的特异性条带;应用联合PCR/RT-PCR方法对延吉市36份犬病料样本进行检测,CPV阳性率为25.00%,CDV阳性率为33.33%,CPV和CDV混合感染阳性率为8.33%。说明试验建立的CPV和CDV联合PCR/RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高,可用于犬细小病毒病和犬瘟热病毒病的临床诊断。

关 键 词：犬细小病毒 犬瘟热病毒 联合PCR/RT-PCR 检测 建立 初步应用 

分 类 号：S852.655[农业科学—基础兽医学]