含绿色荧光蛋白基因与强毒部分糖蛋白B基因的马立克病毒CVI988株转移载体的构建  

Construction of Transferring Vector of Marek's Disease Virus Vaccine Strain CVI988 Containing the Virulent Glycoprotein B and Green Fluorescent Protein Gene

作　　者：张雪莲[1] 范伟兴[1] 魏荣[1] 陈溥言[1] 

机构地区：[1]南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京210095

出　　处：《农业生物技术学报》2002年第2期160-162,共3页Journal of Agricultural Biotechnology

摘　　要：提取马立克病病毒疫苗毒株CVI988/Rispens感染的鸡(Gallusdomesticus)胚成纤维细胞(CEF)的总DNA为模板,利用PCR技术扩增出病毒生长非必需的US2基因(约2.0kb),将其克隆入T-easy载体获得载体pGUS2。用EcoRⅠ和BamHⅠ消化pUR-MDVEgB质粒,回收1.8kb包含糖蛋白B(gB)基因主要抗原位点片段,插入pEGFP-C1质粒多克隆位点,构建了在CMV启动子和增强子控制下的含GFP及部分gB基因的表达盒。将此表达盒克隆入pGUS2载体US2基因中,成功地构建了含GFP及部分gB基因的转移质粒载体pEGFPgB。为其与CVI988毒株共转染CEF可获得表达GFP及强毒部分gB蛋白重组CVI988疫苗毒株打下基础。Using extractedtotalDNAfromMarek'sdiseasevirus(MDV)vaccinestraininfectedChicken(Gallus domesticus)embryofibroblasts(CEF)cellsas template,the2.0kb US2 genenonessentialforviralreplicationwas amplifiedby polymerasechain reaction(PCR)andclonedintoT-easyvectorto obtainpGUS2.A1.8kb fragmentencodingmainepitopesof MDVGlycoproteinB(gB)frompUR-MDVEgBplasmiddigestedwithEco RⅠandBam HⅠwas insertedintoMCS of pEGFP-C1vectorto construct pEGFPgBvector.The3.8kbgeneexpressioncassettefrompEGFPgBwasclonedintoUS2geneof pGUS2to obtainthetransferring vectorpGUS2gB1,whichisthebasisof obtainingtherecombinantCVI988/RispensstrainexpressingvirulentMDVgBandEGFP.

关 键 词：绿色荧光蛋白基因 强毒部分糖蛋白B基因 马立克病毒 CVI988株 转移载体 构建 

分 类 号：S858.315.3[农业科学—临床兽医学] S852.659.1[农业科学—兽医学]