苏云金芽孢杆菌分子伴侣基因p19的克隆和含有该基因的Bacillusthuringiensis表达载体的构建  

Cloning of the Molecular Chaperone Gene p19 from Bacillus thuringiensis(Bt )and Construction of the Bt Expression Vector

作　　者：曾少灵[1] 余健秀[1] 谢瑞瑜[1] 蒙国基[1] 谭乐[1] 庞义[1] 

机构地区：[1]中山大学生物防治国家重点实验室昆虫学研究所,广州510275

出　　处：《农业生物技术学报》2002年第2期184-188,共5页Journal of Agricultural Biotechnology

基　　金：国家转基因植物专项基金(J00-A-003);国家自然科学基金(39900098);广东省自然科学基金(001272;980296)。

摘　　要：苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)中的分子伴侣P19蛋白能否提高杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystalproteins,ICPs)的表达量及促进晶体形成,目前尚不能确定。根据已知序列,设计了一对引物(p19-5N,p19-3N),利用这对引物从苏云金芽孢杆菌以色列亚种(B.thuringiensis subsp.israelensis)HD-567中扩增出一个1.0kb的DNA片段。序列测定及分析结果表明,这个DNA片段包含cry11Aa操纵子启动子序列、全长p19基因及其偶联的下游基因cry11Aa的ATG起始密码子。将这个片段克隆到Bt-E.coli穿梭载体pHT3101上,构建成一个含有p19基因的Bt表达载体pHP19。其特点是在p19基因下游的ATG处顺序插入了5个限制性酶切位点NdeⅠ,SacⅠ,KpnⅠ,SacⅠ和Eco RⅠ,为下一步研究p19基因的功能奠定了基础.Upto date,itis notcertainwhetherthemolecularchaperoneproteinP19fromBacillus thuringiensis(Bt ) enhancesthe netyieldof someinsecticidalcrystalproteins(ICPs)andfacilitatesthecrystallizationof ICPs.In thisstudy,a DNAfragmentwiththe predicatedsizeof1.0kb,was obtainedby PCRfromB.thuringiensis subsp.israelen sis strainwitha pairof primers(p19-5Nand p19-3N)designedaccordingto theknownsequence.ThisDNAfragmentcontainedthecry11Aa operonpromoter,thefull-lengthp19 geneandtheATGinitiationcodonof theconnectedgenecry11Aa downstream.The1.0kb DNAfragmentwasinsertedintotheBt-E.coli shuttlevectorpHT3101to geta Bt expressionvectorpHP19,withfiverestrictionsitesof NdeⅠ,SacⅠ,KpnⅠ,SacⅠandEco RⅠaddedinorderatthepositionof theATGof thecry11Aa gene.Andthesuccessfulconstructionof thisvectorwouldlayan important foundationforthefurtherresearchon functionsof themolecularchaperonegenep19.

关 键 词：苏云金芽孢杆菌 分子伴侣基因p19 克隆 表达载体 杀虫晶体蛋白 

分 类 号：S476.11[农业科学—农业昆虫与害虫防治] S188[农业科学—植物保护]