BtcryⅠA(c)杀虫基因向棉花内生细菌Bacillus cereus染色体中整合的研究  

Cloning of Bt cryⅠA(c) Gene into the Chromosome of Cotton Endophytic Bacterium Bacillus cereus

作　　者：徐静[1] 张青文[1] 丁军[1] 周明牂[1] 

机构地区：[1]中国农业大学昆虫学系,北京100094

出　　处：《农业生物技术学报》2002年第2期189-193,T002,共6页Journal of Agricultural Biotechnology

基　　金："973"国家重点基础研究项目(G200016209)。

摘　　要：将来自Bacillusthuringiensis subsp.kurstaki的Bt cryⅠA(c)杀虫基因通过综合质粒载体pBC601,整合到棉花(Gossypiumhirsutum)优势内生细菌Bacilluscereus(Bc 9002)的染色体上,得到的工程菌对棉铃虫(Helicoverpaarmigera Hb.)有杀虫活性。此综合质粒含有能在营养期表达BtcryⅠA(c) 基因的强启动子、cryⅠA(c) 杀虫基因、四环素抗性标记基因tetr、8.0kb的EcoRⅠ-NcoⅠB.cereus染色体片段。将综合质粒通过电击导入B.cereus(Bc 9002)中,综合质粒因含B. cereus染色体片段,可与B.cereus染色体发生同源重组,从而将BtcryⅠA(c) 基因整合到B.cereus的染色体上。通过对转化子的DNA酶切分析、PCR扩增、SDS-PAGE凝胶电泳检测、ELISA检测、电镜观察、毒力测定,结果表明BtcryⅠA(c)基因已经整合到内生细菌Bc 9002的染色体上,并可高效表达。Bt cryⅠA(c) genefromBacillus thuringiensis subsp.kurstaki wasintroducedintothechromosomeof Bacillus cereus(Bc 9002)by an integrativevectorpBC601whichcontainsa strongvegetativepromoter,thecryⅠA(c)gene(identifiedas a7.4kb SphⅠ-NruⅠfragmentof DNAfromB.thuringiensis HD-73),thetetracyclineresistancegene(tet r )anda8.0kb Eco RⅠ-NcoⅠfragmentof chromosomalDNA from Bc 9002to allow for homologousrecombinantbetweenthe vectorand the bacterial chromosome.Transformationof Bc 9002withplasmidpBC601by electroporationresultedin theengineeredendophyticbacteria.Insertionof vectorDNA intothe chromosomewas demonstratedby DNA restrictionenzymesanalysisand PCRamplification.RecombinantstrainscontainingBt cryⅠA(c) genewereshownto producethe133kDprotoxinwhichcouldbe detectedby SDS-PAG E,ELISA,electronmicroscopeobservationandinsectbioassays.

关 键 词：Bt CRY I A(c)杀虫基因 棉花内生细菌 染色体 整合 同源重组 电转化 

分 类 号：S476.11[农业科学—农业昆虫与害虫防治] S435.622.3[农业科学—植物保护]