酵母双杂合系统AD端阴离子交换蛋白C-末端表达质粒的构建  

Cloning of AE1-c-end cDNA and Construction of Its Expression Plasmid for Yeast Two-Hybrid System

作　　者：李宏涛[1] 傅国辉[1] 秦勇 杜洪清[1] 姜晓姝[1] 刘明[3] 孔宪刚[1] 

机构地区：[1]哈尔滨医科大学病理生理学教研室,哈尔滨150086 [2]哈尔滨市职工医院,哈尔滨150041 [3]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术室国家重点实验室,哈尔滨150001

出　　处：《生物医学工程学杂志》2002年第2期274-286,290,共14页Journal of Biomedical Engineering

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (3 9970 2 91)

摘　　要：利用 PCR方法 ,从阴离子交换蛋白 1(AE1)全长 c DNA中扩增出约 35 0 bp c末端 c DNA片段。测序后将其克隆至 p GADT7载体上。用醋酸锂法将构建好的 p GADT7- AE1- c-末端转染酵母菌 AH10 9,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果表明 ,获得了 35 0 bp AE1c-末端 c DNA,p GADT7- AE1- c-末端对酵母无毒性 ,不能激活检测基因 。In this study, about 350bp cDNA fragment was amplified by PCR. After being sequenced, the AE1 c end gene fragment was cloned into EcoRⅠ PstⅠ site of pGADT7 to form AD ends in the yeast two hybrid system. The recombinant plasmid was transformed into yeast AH109,and the expression in the yeast was observed.The results demonstrate that AE1 c end was obtained. pGADT7 AE1 c end has no toxic effect on the yeast. It can serve as a target gene of yeast two hybrid system.

关 键 词：酵母双杂合系统 AD端阴离子交换蛋白 C-末端 质粒 构建 克隆 

分 类 号：R341[医药卫生—基础医学]