CO差光谱法分析重组大肠杆菌中的透明颤菌血红蛋白  

Carbon monoxide difference spectrum analysis of Vitreoscilla hemoglobin in recombinant E.coli

作　　者：于慧敏[1] 史悦[1] 沈忠耀[1] 杨胜利[2] 

机构地区：[1]清华大学化学工程系生物化工研究所,北京100084 [2]中国科学院上海生物工程研究中心,上海200233

出　　处：《清华大学学报（自然科学版）》2002年第5期615-618,共4页Journal of Tsinghua University(Science and Technology)

基　　金：国家"九五"科技攻关项目 ( 96 -C0 3-0 3-0 2 );国家自然科学基金重点资助项目 ( 2 983410 3);国家自然科学基金资助项目 ( 2 9876 0 2 1)

摘　　要：为检测产聚 β-羟基丁酸酯 (PHB)的重组大肠杆菌VG1(p TU14)中表达的透明颤菌血红蛋白 (VHb) ,建立了改进的 CO差光谱法。结果表明 ,PHB对 VHb的检测有较严重的干扰。 VG1(p TU14)的全细胞悬浊液经过 4次冻融、低速离心和过量的 Na2 S2 O4还原后 ,在试样端通入 CO进行3m in络合反应并在黑暗条件下静置 5 min,最后进行 VHb的 CO差光谱分析。当菌浓小于 2 5 m g/ m L缓冲液时 ,其定量关系符合 L am ber- Beer定律 ,可以准确地定量分析An improved method using the carbon monoxide (CO) difference spectrum was used to analyze Vitreoscilla hemoglobin (VHb) in recombinant Escherichia coli, VG1 (pTU14), producing poly-β-hydroxybutyrate (PHB). The PHB granules caused heavy interference with the VHb spectra. The interference was eliminated using four freeze-thaw cycles, centrifugation at low speed, and excess sodium dithionite treatment. Then CO gas was bubbled into the whole cell suspension of VG1 (pTU14) for 3 min to coordinate with VHb and the suspension was placed in the dark for 5 min for better spectra. The Lambert-Beer law can be used to quantitatively analyze VHb when the cell concentration is less than 25 mg/mL.

关 键 词：CO差光谱法 重组大肠杆菌 透明颤菌血红蛋白 聚Β-羟基丁酸酯 定量分析 Lamber-Beer定律 基因表达 

分 类 号：Q510.3[生物学—生物化学]