噬菌体展示技术筛选布鲁氏菌OMP25特异性结合肽  

Screening of the Peptides Binding to the Outer Membrane Protein OMP25 of Brucella by Phage Display Techniques

作　　者：张亚丽[1,2] 陈创夫[3] 黄小强 张科[3] 张璘[1] 李永祥[1] 王远志[1] 

机构地区：[1]石河子大学医学院,新疆石河子832000 [2]石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000 [3]石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000 [4]新疆福科油品股份有限公司,乌鲁木齐830026

出　　处：《内蒙古大学学报（自然科学版）》2014年第4期385-390,共6页Journal of Inner Mongolia University：Natural Science Edition

基　　金：国家973资助项目(2010CB530203);国家科技支撑计划资助项目(2013BAI05B05);国家自然科学基金资助项目(31060334;30800813)

摘　　要：利用噬菌体展示技术和ELISA筛选与布鲁氏菌外膜蛋白OMP25结合的七肽分子.将纯化的OMP25-32a包被于聚乙烯板上,对随机噬菌体七肽库进行4轮筛选后挑取噬菌体克隆,ELISA鉴定噬菌体克隆对OMP25-32a的亲和力和特异性.并将阳性噬菌体克隆扩增、测序、获得多肽氨基酸序列,生物信息分析筛选出特异的环形七肽分子.结果从噬菌体七肽库中筛选出42个噬菌体阳性克隆,测序翻译得到对应的42个环形七肽分子;ELISA结果表明,42个噬菌体中9#、11#、35#、38#和41#与融合蛋白OMP25-32a具有较强的亲和性;生物信息学分析42个环形七肽分子中11#环形七肽与锌指蛋白ZNF446有高度同源性.筛选获得了与布鲁氏菌外膜蛋白OMP25相互作用的环形七肽分子LT-7C,为进一步研究抗布鲁氏菌病的药物治疗提供科学依据.The purified recombinant OMP25-32a was obtained after four rounds of selection by random c7c phage peptide library,and the positive phage colonies specifically binding to OMP25 were screened out.The positive phage colonies were further proved by ELISA and sequenced,42 positive phage colonies were obtained.5 of these 42 colonies,including 9#、11#、35#、38# and 41#,had high affinity to Brucella OMP25-32a.Bioinformation analysis showed that 11# cyclic heptapeptide named LT-7C,had high homology with the protein ZNF446 in amino acid sequence level.This study may provide scientific basis for future drugtreatment of brucellosis.

关 键 词：筛选 QMP25 噬菌体展示技术 

分 类 号：S852.61[农业科学—基础兽医学]