薄皮甜瓜果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立  

The Establishment of Optimizational Two-dimensional Electrophoresis System for Melon Fruit

作　　者：黄雅芳[1] 杨瑞[1] 王志忠[1] 王建立[1] 季玉杰[1] 王璐[1] 赵珈锐 潘高扬 李维根[1] 王嘉兴[1] 刘竹慧 盛鹏飞[1] 郝敬虹[1] 

机构地区：[1]北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206

出　　处：《中国农学通报》2014年第19期98-104,共7页Chinese Agricultural Science Bulletin

基　　金：国家自然科学基金委科研项目"薄皮甜瓜果实发育早期细胞膨大相关蛋白的鉴定及其相互作用分析"(31201641);北京市科学技术委员会科技新星项目"生长素响应因子ARF在调控甜瓜座果中的作用及其机理研究"(Z131105000413);北京市教育委员会项目"科研基地建设-科技创新平台-蔬菜创新平台建设"(PXM2014_014207_000028);北京市教育委员会项目"科研基地建设--植物生产类研究生种业实验实习平台建设"(PXM2014_014207_000073);北京市教育委员会项目"2014年本科生教育教学科研训练";国家科技部"十二五"科技支撑项目"京郊农业产业循环技术集成与示范:蔬菜废弃物养分资源循环技术"(2012BAD14B09)

摘　　要：为建立适宜的薄皮甜瓜果实总蛋白质双向电泳的试验体系,以‘京蜜11号’薄皮甜瓜为试材,从果实总蛋白质的提取方法、等电聚焦条件、IPG胶条梯度等方面进行了探索优化。结果表明,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法能够高效的提取薄皮甜瓜果实总蛋白质,选用24 cm pH 4-7的IPG胶条,800μg上样量,120000 Vhs聚焦,SDS-PAGE电泳后采用胶体考马斯亮蓝染色。该优化的体系可以获得背景清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。To establish an appropriate two-dimensional electrophoresis system of melon fruit, the variety of Cucumis melo‘Jingmi 11＇was used as material, parameters including protein sample preparation, isoelectricfocusing condition and the pH gradient of IPG strip were optimized. The result showed that the optimizedsystem included the following steps： extracting the total protein from melon fruit by phenol- methanol/ammonium acetate, separating the proteins with 24 cm pH 4-7 IPG strips, loading protein samples of 800 μg,120000 Vhs isoelectric focusing and staining the gels by colloidal coomassie brilliant blue staining after SDS-PAGE electrophoresis. Clear background, reproducible profiles with high resolution were obtained by thisoptimized 2-DE system of melon fruit.

关 键 词：薄皮甜瓜 果实 蛋白质 双向电泳 条件优化 

分 类 号：S652[农业科学—果树学]