构建P16慢病毒载体永生化心肌干细胞的探讨  

作　　者：蒋续钢 张琳[1] 廖翔 张西峰[3] 

机构地区：[1]山西医科大学 [2]深圳市第六人民医院 [3]解放军总医院

出　　处：《中西医结合心脑血管病杂志》2014年第7期864-865,共2页Chinese Journal of Integrative Medicine on Cardio-Cerebrovascular Disease

摘　　要：目的构建P16慢病毒载体,为修复坏死心肌干细胞提供理论基础。方法构建pLVX-p16ink4a-ZsGreen、pLVXP16INK4a慢病毒载体,将P16目的基因转导入目标细胞。利用倒置免疫荧光显微镜观察携带绿色荧光蛋白的pLVX-p16ink4a-ZsGreen阳性转导细胞的变化,并通过β-半乳糖苷酶染色鉴定观察pLVX-P16INK4a转导阳性细胞即衰老细胞的变化。利用Western blotting法测定P16目的基因转导成功后蛋白变化水平。结果携带绿色荧光蛋白的pLVX-P16ink4a-ZsGreen阳性转导细胞传代增殖受到抑制,β-半乳糖苷酶染色鉴定观察pLVX-P16INK4a转导阳性细胞即衰老细胞增殖受到抑制,上述两种阳性转导细胞在细胞培养传代过程中被稀释。Western blotting法测定p16INK4a蛋白水平也存在稀释变化。结论构建P16慢病毒载体转导目标细胞传代培养过程中,目的基因P16在细胞传代增殖过程中存在抑制作用,并可导致转导阳性细胞稀释。

关 键 词：P16 慢病毒 衰老 心肌细胞 增殖抑制 传代稀释效应 

分 类 号：R329.2[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]