基于锚定PCR技术对10种重要农业害虫微卫星DNA位点的筛选及其特征分析  

Isolation and characterization of microsatellite DNA loci from ten important agricultural pest insects using anchored PCR method

作　　者：李慧[1] 郎坤玲 沈长朋[1] 李洁[1] 陶云荔[1] 褚栋[1] 

机构地区：[1]青岛农业大学农学与植物保护学院,山东省植物病虫害综合防控重点实验室,山东青岛266109

出　　处：《生物安全学报》2014年第1期60-65,共6页Journal of biosafety

基　　金：国家科技支撑计划课题(12BAD19B06);青岛市科技发展计划项目(13-1-3-108-nsh);中国科学院知识创新工程重要方向项目(KSCX2-YW-NF-02);泰山学者建设工程专项经费

摘　　要：微卫星DNA广泛存在于真核和原核生物的基因组中，具有多态性丰富、易于检测等特点，在遗传图谱的构建、动植物遗传学育种等方面被广泛应用。利用5′锚定PCR技术对桃小食心虫、桃蛀螟、玉米螟、二点委夜蛾、花蓟马、黄胸蓟马、棕榈蓟马、斑翅果蝇、稻水象甲、扶桑绵粉蚧10种重要农业害虫进行微卫星DNA筛选，并分析各个物种的微卫星DNA的特点。不同物种的阳性克隆率、微卫星比率、克隆效率和冗余率存在不同程度的差异；在核苷酸碱基数目上，主要为二核苷酸重复序列，占重复位点总数的93．2％～100％，三、四核苷酸重复位点较少。在二核苷酸重复位点中， CA/TG重复位点最为丰富，占重复位点总数的89．2％～100％。这与使用的锚定引物密切相关；10种害虫的微卫星DNA平均重复次数为6．7～8．9次，其中玉米螟具有最高的微卫星DNA重复次数（34次）；在序列类型上，完全型序列占上述害虫序列总数的91．0％～100％。5′锚定PCR技术能够快速挖掘害虫的微卫星DNA位点，本研究结果为这些害虫微卫星位点的进一步利用奠定了基础。Background Microsatellite DNA consists of both prokatryotic and eukaryotic genomes .The characteristics include rich polymorphism and easy detection .The technique has been applied in animal and plant genetics and breeding , for the construction for genetic maps .[Method]Using the 5′anchored PCR method , microsatellite DNA from 10 important agricultural pests were isola-ted and analyzed , including Carposina sasakii （ Lepidoptera： Carposinidae ） , Conogethes punctiferalis （ Lepidoptera： Pyralidae ） , Ostrinia nubilalis （ Lepidoptera： Pyralidae ） , Proxenus lepigone （ Lepidoptera： Noctuidae ） , Frankliniella intonsa （ Thysanoptera：Thripidae）, Thrips hamaiiensis （Thysanoptera：Thripidae）, Thrips palmi （Thysanoptera：Thripidae）, Drosophila suzukii （Diptera：Drosophilidae ） , Lissorhoptrus oryzophilus （ Coleoptera：Curculionidae ） and Phenacoccus solenopsis （ Hemiptera： Pseudococcidae ） . The characteristics of microsatellite DNA in these insects were analyzed .[Result]The positive clone rates , microsatellite rates , clo-ning efficiency and redundancy rates of microsatellite DNA among the species were variable .Dinucleotide repeats were the most a-bundant repeat types （93.2%-100%）, while trinucleotide and tetranucleotide were rare .Among the dinucleotide repeats , AC/GT is the most abundant type （89.2%-100%）.This is closely related to the anchor primer;The average repeat number within these species was 6.7-8.9 and the highest repeat number （34） was detected in O.nubilalis;The types of microsatellite mainly consist of the perfect type （ 91 .0%-100%） .[Conclusion and significance]The anchored method can be used to reveal the microsatellite DNA in the agricultural pests , and can be used in monitoring and detection .

关 键 词：农业害虫 微卫星 5′锚定PCR技术 克隆 特征分析 

分 类 号：S433[农业科学—农业昆虫与害虫防治]